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進(jìn)口兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3試劑盒

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更新時(shí)間:2022-08-21 20:36:14瀏覽次數(shù):1538

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產(chǎn)品簡介

進(jìn)口兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3試劑盒樣品采集:收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月。-70℃可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

詳細(xì)介紹

進(jìn)口兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3試劑盒原理與分類

1.  原理

 ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原 或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用 洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上 。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物 質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很 高的敏感度。

2. ELISA的類型

ELISA 可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個(gè)必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑 "(immunosorbent);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根 據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型:

進(jìn)口兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3試劑盒間接法測抗體

間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法 (見圖2-3)。

操作步驟如下:

1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

2)加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性 抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3)加酶標(biāo)抗抗體。可用酶標(biāo)抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標(biāo)抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體 抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。

4)加底物顯色

本法主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的 方法。

間 接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提高試驗(yàn)的特異性。特 別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì),例如以 E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發(fā)生 反應(yīng)。抗原中也不能含有與酶標(biāo)抗人Ig反應(yīng)的物質(zhì),例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗(yàn)中也發(fā)生假陽性 反應(yīng)。另外如抗原中含有無關(guān)蛋白,也會因竟?fàn)幬蕉绊懓恍Ч?/span>

間接法中另一種干擾因素為正常血 清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性 IgG只占總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強(qiáng),非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時(shí)也可吸附到包被抗原的表面。因 此在間接法中,抗原包被后一般用無關(guān)蛋白質(zhì)(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外, 在檢測過程中標(biāo)本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結(jié)果的判斷。

競爭法測抗體

當(dāng) 抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時(shí),可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗 體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直 接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固 相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭結(jié)合反應(yīng)。競爭法測抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗 原競爭結(jié)合,抗HBc   ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相 上的抗原反應(yīng)。抗HBe的檢測一般采用此法。

競爭法測抗原

小 分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標(biāo)本中的 抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素 、藥物等ELISA測定多用此法。


優(yōu)點(diǎn):適用于各種大小的質(zhì)粒(<14kb);高保真PCR酶和Dpnl酶同時(shí)升級;節(jié)約反應(yīng)時(shí)間2/3,僅需半天;包含超級高效應(yīng)感受態(tài)細(xì)胞,物超所值;精確、高效的突變,決無意外突變。

ELISA檢測試劑盒種屬】:鹿、羊、雞、鴨、狼、魚、馬、牛、人、大鼠、犬、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、馬鈴薯、兔子、豬、猴等動植物。

【產(chǎn)品用途】:科研實(shí)驗(yàn),用于被測樣品定性定量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】:96 TEST

【檢測方法】:酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)

【保存條件】:2-8

【供  期】:2-3現(xiàn)貨供應(yīng)

【產(chǎn)品性狀】:液體盒裝

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待檢樣本:體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標(biāo)本等

樣品采集:收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本,儲存在4備用,如有特殊原因需要周期收集標(biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20-70條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8可保存48小時(shí),-20可保存1個(gè)月。-70可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

洗板方法

1.  手工洗板方法:吸去不可觸及板壁或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

2.  自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

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