熒光顯微鏡的應用
近二十年來，熒光顯微鏡在生物學和醫學的許多領域內得到了廣泛的應用，現在它已經成為一種重要的*的觀察和側試手段。一個非常重要而且廣泛應用的技術是免疫熒光，當用抗原一抗休相互特異作用的熒光標記抗體進行處理時，就能夠地對生物標本中的特異結構、特異組分進行定位。在許多研究領域內，比如細胞遺傳學中的染色體分析、神經組織中的組織化學以及蛋白質和核酸的定位中，熒光顯微鏡已經變成一種重要的工具。當能夠檢測標本中熒光染料的很小含量時，就可以用它對組織和細胞中的一定的物質進行定位和定量，Rigler （ 1969）已經能夠用這種方法確定在一個單細胞中10-36g的DNA含量。特別是當熒光顯徽鏡與細胞光度計結合起來制造出熒光顯微光度計后，它變為一個非常靈敏而又方便的細胞化學測量儀器，可以地測定細胞中蛋白質、DNA, RNA等一些組分的含量。
在熒光顯微鏡的使用中，應注意以下幾個問題:
（1）標本。用于熒光顯微鏡的標本不宜太厚，否則會消耗大部分激發光，而且物鏡直接觀察到的標本上部不能得到充分的激發。另外，太厚的標本往往因細胞重迭或雜質掩蓋，會降低像的反差和清晰度。
（2）載玻片。載玻片的厚度一般應在0.8-1.2mm之間，太厚的玻片不僅吸收較多的光能，而且不能使激發光在標本平面聚焦。玻片應光照均勻，無油跡，無劃痕。否則，將會出現雜亂的非特異熒光，影響觀察和判斷。使用很薄的對紫外光有很好通透性的石英玻片。
（3）蓋玻片。所用蓋玻片可以是一般的玻瑞，因為只有在可見光范圍內的熒光對于像是重要的。為了加強激發光，用干涉蓋玻片，它可以讓熒光順利通過，而反射激發光。被反射回來的激發光又可以再次激發標本。
（4）封藏劑。封藏劑必須是無熒光、無顏色的，通常使用優級分析純甘油鹽水緩沖液（90%甘油，10%磷酸鹽緩沖液，pH7.1-3.6 ）。為了固定蓋玻片，可用。.5%明膠，加到玻片以后以10%福爾馬林固定，也可用淀粉青。另外，還可以使用水、甘油、阿拉伯樹膠、糖漿和液體石蠟等。加拿大樹膠具有熒光性，因而不能作封藏劑。
（5）浸油。在普通顯微鏡中所用的香柏油是不能直接使用的，必須加入一定童的硝基苯（熒光熄滅劑）才勉強可用，但效果不好;純植香油是比較好的浸油，另外液體石蠟和純甘油（加10%磷酸鹽緩沖液）是比較好的代用品，用起來也很方便。只是折光率較低，對像的質量略有影響。
（6）固定液。不能用自身產生熒光或抑制熒光的物質作為固定液，福爾馬林和酒精是比較安全的固定液，但不要使標本長時間浸入福爾馬林中，石蠟也常常會發生熒光。
（7）粘著劑。貼切片用的蛋白甘油粘著劑也會產生熒光，因而要以蒸餾水代替。較好的方法是冰凍切片，但熒光物質具有水溶性時有流出的危險。
（8）眼睛的保護。用明視野透射光觀察熒光時，大部分紫外線就能直接通過目鏡而傷害眼睛。為了防止紫外光，目鏡上面可以裝設保護鏡（撼光鏡），以吸攻紫外光。當用暗視野集光器進行熒光觀察時，必須注意不要使物鏡的數值孔徑過大，否則，紫外光仍會進入眼睛。使用落射光照明裝置是防止紫外線傷害作用的有效方法。
本文來源www.cnrico.com
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