血液基因組 DNA 提取試劑盒(快速型)
【簡單介紹】
品牌 | 其他品牌 | 規格 | 50 |
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供貨周期 | 現貨 | 主要用途 | (適用于從各種糞便中提取總 DNA) |
【詳細說明】
血液基因組 DNA 提取試劑盒(快速型)
Blood Genomic DNA Extraction Kit
(適合從 50-200 μl 血液中提取基因組 DNA)
血液基因組 DNA 提取試劑盒(快速型)
試劑盒組成:50 (50 次)
儲存條件:本試劑盒在室溫(15-25 ℃)下可保存一年。
產品特點:
TM Blood Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術,*去除全血中蛋白和大部分 RNA 等各種干擾物,提取高純度的 DNA。試劑盒采用*的緩沖統,適用于多種不同類型的血液,同樣適用于從新鮮或冷凍的血漿、血清和其它無細胞體液中提取病毒 DNA。
注意事項:
1.實驗前準備工作:詳細閱讀該手冊熟悉各步驟,并準備好所有的試劑盒組分、1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管、以及 37 ℃和 65 ℃的溫浴條件。
2.KBL1 和 KW1 在低溫時可能產生混濁或沉淀,在 37-65 ℃溫浴片刻即可。
3.Buffer KW *次使用前請按瓶上標簽加入 50 ml 無水或 95%乙醇, 并常溫保存。每次使用后,請立即擰緊蓋子。
操作步驟:
(一)平衡吸附柱
1.取一 KarrotenTM Mini Column 柱裝在一個 2 ml 收集管上(已備)。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內,室溫 13 000 rpm 離心 1 min,使平衡液*流過柱子。棄收集管中的濾液,將空柱套回收集管內。
注意:柱子不平衡,將導致 DNA 產率減少。
(二)樣品處理
2.(1)按 100 μl 全血(適合各種抗凝劑,EDTA 較好)加入 100 μl 等體積的 KTL1,混勻,37℃溫浴 5min。
(2) 加入 1000 μl KBL1,混勻 1min。
注意: 取樣體積因物種不同有所差異。人血以 100-200 μl 為,小鼠以 50-100 μl 為。且當全血體積大于 200 μl 時,KBL1 體積按比例擴大。
(二)吸附
3.將混合液轉移至已平衡的吸附柱內,室溫 13 000 rpm 離心 30 s,使裂解液*流過柱子。保留柱,棄去收集管中的過濾液,將柱重新放入收集管。
注意:如混合液體積過大,可分數次上柱,每次上樣量不要超過 700 μl。
4.(可選)加入 30 μl 濃度為 20-50 μg/ml 的RNase A 于柱的膜上,37 ℃放置 5-10 min。
注意:本試劑盒沒有配備 RNase A 溶液。一般來說,這一步沒有必要,因為本試劑盒的純化柱對 RNA 沒有吸附能力。如果實驗要求不能殘留微量RNA,可采用這一步處理。
(三) 漂洗
5.加入 700 μl Buffer KW1,室溫 13 000 rpm 離心 30 s,棄去收集管中的過濾液,保留柱。
6.加入 700 μl Buffer KW,室溫 13 000 rpm 以上離心 30 s,棄去收集管
中的過濾液,保留柱。
注意:Buffer KW 在*使用之前必須加入 50 ml 無水乙醇,并置于室溫下保存。
7.(可選) 重復用 700 μl 70%乙醇(室溫)洗滌柱子,室溫 12 000 rpm
離心 1 min。
8.棄收集管中的濾液,將空柱套回 2 ml 收集管內。室溫下,高轉速或 13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質殘余的液體。
注意:此步驟不可省,否則將導致乙醇殘留于 DNA 中,影響后續反應。
(四)洗脫
9.把柱子裝在一個新的 1.5 ml 離心管上,加入 30-50 μl 的 KE(可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl,pH 8.0 或純水代替,純水可預先用 NaOH 調 pH 值至 8.0)于膜的中央,65 ℃放置 5-10 min,13 000 rpm 以上離心 1 min 以洗脫 DNA。(也可以將 KE 預熱至 65℃,再加至膜上,可以減少放置時間至 1min)
注意:小心加 KE 到柱中吸附膜的中間部位,并確保液體將膜全部覆蓋。
10.DNA 可保存于 4 ℃,若長時間保存,可凍存于-20 ℃。
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診斷血清:沙門氏菌屬診斷血清、志賀氏菌屬診斷血清、大腸艾希氏菌診斷血清、霍亂弧菌診斷血清等。
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