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Calypso生物大分子相互作用分析儀是一個以組分-梯度多角度光散射(CG-MALLS)為基礎的生物大分子間相互作用分析系統,可以快速、自動、無損、定量的表征大分子間的相互作用,具有重復性高、靈敏度高及無需樣品修飾等諸多優點。該系統可以分析分子間的特異性及非特異性相互作用,聚集或解離的動力學等。對于分子間的特異性相互作用,Calypso可以測定其自聚作用及不同樣品分子間的異聚作用,得到平衡解離常數Kd及反應的化學計量數。對于非特異性相互作用,可以測定其維力系數,并判斷分子間的作用力及強度。此外,Calypso還可以測定反應的動力學,樣品的重均分子量及均方根半徑等重要分子信息。
Calypso分析系統無需對樣品進行修飾(熒光標記、固定化等),且在溶液環境中測量,因此可以大程度的保證樣品的天然狀態,從而得到其他技術難以得到的結果,真實的表征生物大分子間的相互作用,樣品方便回收。
Calypso分析系統的工作原理:組分-梯度多角度光散射(CG-MALS)是新的分析技術之一,利用分子量的變化測定分子間的相互作用。溶液中大分子的散射光強依賴于物質的濃度C和重均分子量Mw,分子間發生復合,Mw則增加。例如,若所有的蛋白質分子以二聚體形式出現,則散射光強也會增倍。對于可逆的聚集,蛋白與單體蛋白復合的比例會達到一個平衡值,這個值依賴于每種蛋白初始的濃度和緩沖液的條件。不同的組成和濃度會導致Mw不同。通過分析一系列不同組成和濃度的光散射結果,可以確定所發生的聚集形式、各自的結合親和力Ka、結合和解離平衡常數。手動配制比例及測量是一項繁瑣、費時間且容易產生操作誤差的工作,Calypso系統通過自動化的過程克服了CG-MALS手動操作的困難,將樣品配制、輸送及數據的采集和分析集合于一體,保證了實驗的重復性,并解決了人工配制樣品時引入操作誤差的問題。
技術優勢
1. 智能化配樣,消除了手動配樣時的誤差問題;
2. 樣品直接測試,無需標記化或固定化,大程度的保證了樣品的天然狀態;
3. 快速的測定時間,半小時即可測得實驗結果;
4. 適用于各類生物反應體系的測定;
5. 體系中自聚及不同樣品分子異聚的分析;
6. 化學計量點,平衡常數的分析,平衡常數范圍:pM – mM;
7. 反應動力學的分析;
8. 與激光檢測器、濃度檢測器聯用,快速測定物質的Mw、Rg、A2、A3;獲取Zimm圖;
Calypso生物大分子相互作用分析儀應用領域:
1. 酶反應體系:酶與抑制劑的相互作用,酶促動力學等
2. 藥物探索:藥物對蛋白質間相互作用的影響等
3. 免疫研究:抗原/抗體的相互作用等
4. 方法改進:測定及調整第二維力系數,幫助純化抗體,確定多聚體的組成,確定樣品的優溶解條件等。
5. 結合特異性:化學計量點,平衡常數,離子強度、pH或者輔料對多聚物或者蛋白結合的影響等。
6. 多分子復合物的結構分析:在一系列緩沖溶液、時間、溫度變化下,表征大分子聚集過程中分子間的結合強度,以及確定其化學計量關系,通過Mw及Rg判斷其空間構型。