工藝開發和生產中,生物反應器或其他細胞培養工具中重要的培養基營養成分和細胞代謝物需要在一些關鍵時間點進行監測。REBEL是一個高度集成的分析儀,它能夠以很小的樣本量、快速的分析時間,幫助加快工藝開發策略的優化。REBEL僅需對樣品進行離心或過濾后稀釋,這比傳統LC或LC-MS方法要簡單得多,分析時間也更短。
一、CHO細胞培養基分析
CHO細胞CDM培養基通常有兩種形式:液體和干粉。當決定使用哪種培養基類型時,研究人員必須了解項目所需的培養基數量。液體培養基可以直接用于小型生物反應器、搖瓶和微孔板。而干粉必須經過配制,但干粉的運輸和儲存通常更容易也更便宜,所以干粉培養基通常用于更大的培養體積。許多公司都有專門的培養基配制人員和實驗室來配制干粉培養基,以簡化細胞培養和上游流程開發的工作流程。在補料之前快速地分析新鮮培養基的成分,可以確保培養基成分在放大或配制前后的培養基成分的一致性。
以上報告的濃度來自于對干粉和液體的CDM培養基配方的分析(兩種培養基混合物都沒有谷氨酰胺)。對于干粉,按照制造商的說明來制備。樣品都用REBEL稀釋劑稀釋10倍,報告的濃度為5次重復試驗的平均值。
二、含血清和其他添加劑的培養基分析
CDM培養基的成分分析可能會因為血清(FBS)和其他添加劑的存在而變得復雜。圖中,CDM培養基中的成分濃度不受胎牛血清存在的影響(0-25 %,圖左)。在第二個實驗中(圖右),CDM培養基中報告的成分濃度同樣不受其他幾種不同添加劑的影響。而這樣的結果,對于REBEL而言,只需用稀釋液將樣品離心或過濾后稀釋100倍,不需要額外的任何樣品準備工作。
三、T細胞培養基分析
隨著更多的無動物源、商業培養基的引入,了解T細胞培養過程中需要補料哪些組分很重要,可以更容易地確保生產工藝的一致性。采用REBEL檢測RPMI +血清、有無添加血清的combo (基礎及細胞擴增版本)、單獨的基礎培養基和單獨的細胞擴增培養基的必需氨基酸含量。
四、HEK293 CDM培養基分析
對來自四家供應商的HEK293培養基進行了測試,以確定針對同種細胞的不同培養基配方之間的差異。分析前將培養基稀釋100倍(n = 5)??偟膩碚f,來自供應商3的培養基中幾種成分的濃度最高。
五、間充質干細胞培養基分析
測試了兩種不同的間充質干細胞培養基與補液。分析前將培養基稀釋10倍(n = 5)。當添加補液時,培養基1的氨基酸水平沒有差異,但在培養基2中,Gly、Ile、Phe、Pro、Ser、 Thr,、Trp和Val的濃度大幅增加。
使用方法和樣品處理:
你所看到的就是你所得到的。
REBEL側面不需要外部計算機、壓縮氣瓶、廢物或者試劑瓶。
您需要做的只是,取品(1)后離心或過濾以除去細胞,并用REBEL稀釋液(2)稀釋。然后將樣品載入設備(3),按“start"(4)。所有的校準劑和試劑都放在REBEL儀器內部,數據將被自動處理成報告(CSV或PDF),可用U盤導出(5)。
研究人員不僅需要確保他們所使用的細胞培養基適合他們的應用,同時也應考慮在運輸過程、在儲存期間和培養過程中頻繁分析其中成分濃度的變化,以確保細胞生長和生產方面的任何變化都不是由細胞培養基配方/成分濃度的未知變化而產生的。而REBEL將會是做這些的得力助手。
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