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血清脂蛋白的離心分離方法

閱讀：3504 發(fā)布時間：2012-7-23

利用不同容量的角式轉(zhuǎn)頭及很容易配制的梯度液，在各種型號的超速離心機(jī)上都能得到滿意的分離結(jié)果。下面舉了幾個分離實例，實際上還可以應(yīng)用于各種型號各種容量的固定角式轉(zhuǎn)頭。

（一）梯度液

A液：11.40gNacl，0.1g EDTA-Na2，置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1

ml 1N NaOH，混勻至全部溶解。加重蒸水至1000mlzui后再加3ml重蒸水（Nacl：0.195mol）。終密度1.006g/cm³，PH10.37。

B液：加24.98g NaBr 到100ml A液中。終密度1.182g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH9.72。

C液：加78.32g NaBr 到100ml A液中。終密度1.478g/cm³。（Nacl：0.195mol， NaBr：7.65mol），PH8.86。

（二）離心機(jī)及轉(zhuǎn)頭

• 離心機(jī)：Hitachi CP-MX系列超速離心機(jī)或其他類似機(jī)組。

Hitachi CS-150GXL微量超速離心機(jī)。

• 轉(zhuǎn)頭，離心管；S 140 AT：140,000rpm,1,050,000×g，10×2ml，K=5，1PC厚壁管。

S 80 AT3：80,000rpm,415,000×g，8×8ml，K=23，6PC厚壁管。

S 70 AT：70,000rpm,505,000×g，8×40ml，K=44，40PA管。

（三）血漿-血球分離：

全血，角轉(zhuǎn)頭或甩平轉(zhuǎn)頭3000rpm×20min，沉淀為血細(xì)胞，上清血漿待用。

（四）乳糜粒分離

離心參數(shù)：各種轉(zhuǎn)頭均可用，4×10⁶（g×min），10℃

梯度液：離心管下部3/4容積為血漿，上部1/4容積為0.15MNacl+0.3MEDTA。PH7.4。

離心結(jié)果：乳糜粒上浮，離心管傾斜，吸管貼管壁慢吸出（約占血漿容積的2~6%。禁令12小時以上供血者血漿中乳糜含量很低，食后供血者含量較高。

（五）血清脂蛋白分離

VLDL分離（ρ<1.006g/cm³）

LDL（含IDL）分離（1.006g/cm³<ρ<1.063g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	*次離心后上部VLDL取出，下部600μl移入另一離心管，加入300μl B液，充分混合	140，000rpm×80min 16℃ 加速：9 減速：7	上部1/3體積LDL+IDL吸出
S80AT₃ （CS-150GXL）	*次離心后上部VLDL吸出，，下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml B液并充分混合	80，000rpm×5.5hrs 16℃ 加速：9減速：7	上部1/3體積LDL+IDL吸出
P70AT （CP-MX系列超速機(jī)或類似機(jī)型）	*次離心后上部11.7ml吸出，下部約24ml 移入另一離心管，加入11.7ml B液，充分混合	70，000rpm×10hrs 16℃ 加速：9 減速：6	上部1/3體積LDL+IDL吸出

HDL分離（1.063g/cm³<ρ<1.21g/cm³）

轉(zhuǎn)頭	離心管內(nèi)液體分布	離心參數(shù)	結(jié)果
S140AT （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部300μl后，下部600μl移入另一離心管，加入300μl C液，充分混合	140，000rpm×140min 16℃ 加速：9 減速：7	可見較明顯分層，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白
S80AT₃ （CS-150GXL機(jī)組）	第二次離心后吸出上部約1.7ml、下部3.4ml移入另一離心管，加入1.7ml C液，充分混合	80，000rpm×8小時 16℃ 加速：9 減速：7	可見較明顯分層，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白
P70AT （CP-MX系列機(jī)或其他類型機(jī)組）	第二次離心后吸出上部1/3、下部2/3移入另一離心管，加入約12ml C液，充分混合	70，000rpm×15小時 16℃ 加速：9 減速：6	可見較明顯分層，上部為HDL，下部為血清白蛋白及球蛋白