實(shí)驗(yàn)原理

花卉組織培養(yǎng)，就是分離花卉植物體的一部分，如莖類、莖段、葉、花、幼胚等，在無菌試管，并配合一定的營養(yǎng)、激素、溫度、光照等條件，使其產(chǎn)生完整植株。由于其條件可以嚴(yán)格控制，生長迅速，1-2個月即為一個周期，因此在花卉植物的生產(chǎn)上有重要應(yīng)用價值。

快速大量繁殖方面：對一些難繁殖的名貴品種花卉及一些短期內(nèi)大量急需生產(chǎn)的花卉，應(yīng)用很廣。蘭花、菊花、唐菖蒲等花卉利用腋芽增生，短期得到大量植株。非洲紫羅蘭可通過葉片，水仙可通地鱗片，誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽，來達(dá)到大量繁殖的目的。

花卉育種方面：百合、鳶尾等許多花卉可以進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，由于生理代謝等方面的原因，常使雜種胚早期敗育，因而得不到雜種植物。而在試管中進(jìn)行胚培養(yǎng)，可使其順利生長，得到遠(yuǎn)緣雜種。此外還可采用愈傷組織誘變、花粉培養(yǎng)等多種方法，來進(jìn)行花卉育種。

培育無病毒苗方面：菊花、唐菖蒲、水仙、郁金香、大麗花等一大批花卉靠無性繁殖法繁殖，病毒逐代傳遞積累，危害日趨嚴(yán)重。而分離花卉植物0.1-0.5毫米大小的生長點(diǎn)，培養(yǎng)得到的基本上是無病毒苗。因此這一技術(shù)已在花卉無病毒苗的培育中廣泛應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

1. 實(shí)驗(yàn)室

     1） 化學(xué)實(shí)驗(yàn)室：主要承擔(dān)配制培養(yǎng)基的任務(wù)。要求具有各種化學(xué)藥品試劑、各種玻璃器皿、稱量天平等。

  2） 洗滌室：主要進(jìn)行玻璃器皿的洗滌，要求有自來水裝置，同時有烘箱，以便洗后烘干。
  3） 滅菌室：主要進(jìn)行培養(yǎng)基和用具的消毒。要有高壓滅菌鍋，具有水源和電源。
  4） 接種室：是花卉材料分離、消毒接種和轉(zhuǎn)移的場所。要求密閉、清潔、整齊、裝有紫外燈，能隨時滅菌。有的也可用接種箱或超凈工作臺代替。
    5） 培養(yǎng)室：是花卉材料培養(yǎng)生長的地方。要求清潔，保溫好，室溫均勻一致，并有絕熱、防火性能。
2. 設(shè)備方面
   1） 天平：供配制培養(yǎng)基時稱量藥品和激素用。大量元素用普通天平；微量元素和激素用分析天平。
   2） 酸度計(jì)：測定培養(yǎng)基的pH用。
   3） 高壓滅菌鍋：是供培養(yǎng)基和器械用具滅菌用。
   4） 烘箱：洗凈的玻璃器皿干燥滅菌用。
   5） 蒸餾水制造裝置：得到純凈水供培養(yǎng)用。
   6） 冰箱：供貯放母液和植物材料用。
   7） 接種箱或超凈工作臺：為植物材料接種或轉(zhuǎn)移的操作場所。
   8） 空調(diào)機(jī)：控制室溫用。

實(shí)驗(yàn)材料

培養(yǎng)基是花卉植物組織培養(yǎng)中十分重要的基質(zhì)，目前應(yīng)用的有好多種，但其主要成分大體相同，主要成分是水，其他還有大量元素、微量元素、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、蔗糖和瓊脂等。

目前花卉組織培養(yǎng)中應(yīng)用zui多的為MS培養(yǎng)基。其組成是在配制1升（1000毫升）培養(yǎng)基時，加硝酸an1.65克、硝酸鉀1.9克、氯化鈣0.44克、硫酸鎂0.37克、磷酸二氫鉀0.17克、碘化鉀0.83毫克、硼酸5.2毫克、硫酸鎂22.3毫克、硫酸鋅3.6毫克、鉬酸鈉0.25毫克、硫酸銅0.025毫克、氯化鈷0.025毫克、硫酸鐵27.8毫克、蔗糖30克和瓊脂7克。其他生長調(diào)節(jié)物質(zhì)要根據(jù)花卉的種類和培養(yǎng)目的而確定。MS培養(yǎng)基中大量元素濃度過高，為此常采用1/2、1/4大量元素濃度作培養(yǎng)用，這樣生長效果列好。

配制培養(yǎng)基前要準(zhǔn)備好三角瓶、試管、燒杯、量筒、吸和等玻璃器皿，預(yù)先稱好藥品。配制時先將瓊脂溶化，再加入在水中深解的各種營養(yǎng)元素和蔗糖，然后用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)整培養(yǎng)基的pH，一般掌握在5.7左右。以后可分注到養(yǎng)瓶中，蓋好瓶蓋。培養(yǎng)基配好要經(jīng)高壓滅菌。冷卻后放到培養(yǎng)室預(yù)培養(yǎng)3天，如沒有雜菌污染，才可進(jìn)行花卉材料的接種。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 從田間或溫室等地切取花卉材料，選擇健壯無病蟲母株，取幼嫩、分生能力強(qiáng)的部位，以利生長。
2. 自來水沖洗十幾分鐘，有泥的應(yīng)刷去。沖洗干凈后，用70%的酒精浸泡10-15秒鐘消毒。接著用無菌水（經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水）沖洗兩次，再用10%的漂白fen澄清液浸泡20分鐘消毒，zui后用無菌水沖洗3-4次。帶有茸毛不易濕潤消毒的材料可加些洗衣粉。上述操作皆應(yīng)在接種箱或超凈工作臺等無菌環(huán)境條件進(jìn)行。經(jīng)過表面滅菌的材料，用無菌濾紙將水吸掉。再用解剖刀切取所需部位，通常幾毫米大小，培育無病毒苗則應(yīng)在1毫米以下，然后用解剖針或槍式鑷子將材料接種到培養(yǎng)瓶上培養(yǎng)。工具用完即應(yīng)在95%酒精中蘸一下，或用火焰消毒法消毒，避免工具帶菌造成交叉污染。操作時應(yīng)穿工作服、戴工作帽，事先洗凈手，后再用酒精棉擦試一遍。

3. 花卉材料接種后放到培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室是花卉材料培養(yǎng)生長的場所，一般幾到十幾平方米皆可。高度約2米左右，空間小，可節(jié)省控溫能源。培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)架可有木材或金屬制成，有4-5層，每層高40-50厘米，日光燈裝在上方。架長1.2米左右，與40瓦日光燈長一致，寬80-90厘米。每一層可裝兩支日光燈，這樣培養(yǎng)時的照度約為3000勒克斯。培養(yǎng)室的溫度大多采取晝夜恒溫培養(yǎng)，保持在25℃±2℃，也有采取晝夜變溫培養(yǎng)的，夜晚溫度可低些，這應(yīng)根據(jù)花卉生長需要而定。每天日光燈照明12-16小時。

4. 花卉試管苗由于人工提供各方面*條件，一般生長發(fā)育好，根系也多，可往往由于沒掌握其特性，造成移栽時成活率不高。這是因?yàn)樵嚬苊缭谄恐袧穸群芨叩臈l件下培養(yǎng)，人為提供蔗糖等碳源，花卉材料是處一起異養(yǎng)生活狀態(tài)，可以說比溫室生長的花卉還要嬌嫩得多。而突然從瓶中移到土壤讓其過自養(yǎng)生活，往往由于變化太劇烈而造成損傷甚至死亡。為此，花卉試管苗開始移出時，仍應(yīng)罩上玻璃瓶，或蓋上薄膜袋（上開幾個小孔），1周后去掉。有噴霧條件則更理想。開始7-10天要遮蔭，以后逐漸見陽光。移植基質(zhì)以沙與蛭石各半為好，要排水、通風(fēng)好，隔一天澆一次營養(yǎng)液。這樣逐步鍛煉，讓其適應(yīng)環(huán)境。2-3周后經(jīng)馴化鍛煉苗即可移至培養(yǎng)土中栽植。