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天津譜祥偉業(yè)科技有限公司
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進(jìn)口氨基酸分析儀-飼料行業(yè)氨基酸檢測(cè)方案
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更新時(shí)間:2024-06-03 08:45:27

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魚(yú)飼料中氨基酸的高效液相色譜(hplc)檢測(cè)方案 
隨著我國(guó)飼料工業(yè)的發(fā)展,魚(yú)粉的需要量逐年增加,魚(yú)粉的質(zhì)量問(wèn)題越來(lái)越引起飼料行業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的重視。魚(yú)粉是水產(chǎn)飼料的主要蛋白源,尤其含有動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的氨基酸,由于魚(yú)粉用量大,價(jià)格高,有些廠家摻雜使假、以次充好,使魚(yú)粉質(zhì)量參差不齊,這一行為業(yè)給魚(yú)粉品質(zhì)分析帶來(lái)了一定困難。因此,有必要建立一個(gè)有效的手段對(duì)魚(yú)粉中氨基酸進(jìn)行定量分析。

隨著我國(guó)飼料工業(yè)的發(fā)展,魚(yú)粉的需要量逐年增加,魚(yú)粉的質(zhì)量問(wèn)題越來(lái)越引起飼料行業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的重視。魚(yú)粉是水產(chǎn)飼料的主要蛋白源,尤其含有動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的氨基酸,由于魚(yú)粉用量大,價(jià)格高,有些廠家摻雜使假、以次充好,使魚(yú)粉質(zhì)量參差不齊,這一行為業(yè)給魚(yú)粉品質(zhì)分析帶來(lái)了一定困難。因此,有必要建立一個(gè)有效的手段對(duì)魚(yú)粉中氨基酸進(jìn)行定量分析。

以下是譜祥利用LC高效液相色譜儀對(duì)魚(yú)粉進(jìn)行的HPLC檢測(cè)方案。

    1、儀器與試劑

    1.1儀器、設(shè)備
   高效液相色譜儀
   SMA 色譜柱AA:250mm×4.6mm×5μm
    分析天平
    恒溫箱,溫度控制在110±1℃
    微量進(jìn)樣器,(20μL)一支
    漩渦混勻器
    氮吹儀
    針頭過(guò)濾器
    微孔濾膜:0.45µm

    1.2試劑
    鹽酸溶液,6mol/L:將優(yōu)級(jí)鹽酸與水按1:1(V/V)混合。
    氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
    乙腈,色譜。
    三水合醋酸鈉,優(yōu)級(jí)。
    冰醋酸。
    正己烷,色譜。

    2、供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備

    對(duì)照品溶液的制備   取氨基酸混合工作標(biāo)液500ul,用水稀釋至5ml,即得。

  供試品溶液的制備   稱(chēng)取試樣50-100mg(準(zhǔn)確至0.1mg)于據(jù)塞試管中,加入6.0mol/l鹽酸10ml,混勻,充分提取10min,蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中,水解22-24h。冷卻后充分混勻,過(guò)濾。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求移取適量上清液,60℃下氮?dú)獯蹈?,備用。以下按照衍生方法包進(jìn)行。

  方法包衍生方法:將恒溫水浴鍋預(yù)熱至50±1℃,分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來(lái)濃度的1/5倍。精密量取上述對(duì)照品1ml,至于試管中,加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml,搖勻;在50±1℃的水浴中加熱45分鐘,取出,加入正己烷溶液1ml,振搖;并用孔徑為0.45μm有機(jī)膜過(guò)濾,放置30min后,取澄清的下層液進(jìn)行分析實(shí)驗(yàn)。供試品的衍生步驟與對(duì)照品相同。

    3、色譜條件
 色譜柱:AA  4. 6 mmx250 mm,粒度5 µm

    流動(dòng)相:
    流動(dòng)相A:0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH6.5):乙腈=93:7
    配置方法:準(zhǔn)確稱(chēng)取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中,攪拌均勻,溶解,用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5; 準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml,混合均與,抽濾,過(guò)0.45μm濾膜。
    流動(dòng)相B:水:乙腈=20:80。

    配制方法:準(zhǔn)確量取水100ml和乙腈400ml,混合均勻,抽濾,過(guò)0.45μm濾膜。
    波長(zhǎng):254nm
   流速:1. 0 mL/min

 梯度設(shè)置:

T(min)

A%

B%

0.01

100.0

0.0

11

93.0

7.0

13.9

88.0

12.0

14

85.0

15.0

29

66.0

34.0

32

30.0

70.0

35

0.0

100.0

42

0.0

100.0

45

100.0

0.0

60

100.0

0.0

 

4、測(cè)定法
  分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得

 

 

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