A.峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1.篩板阻塞; | 1.a.反沖色譜柱; b.更換進口篩板; c.更換色譜柱; |
2.色譜柱塌陷; | 2. 填充色譜柱; |
3.干擾峰; | 3. a.使用更長的色譜柱; b.改變流動相或更換色譜柱; |
4.流動相pH選擇錯誤; | 4.調整pH值,對于堿性化合物,低pH值更有利于得到對稱峰; |
5.樣品與填料表面的溶化點發生反應; | 5.a.加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑。b.更改色譜柱。 |
B.峰前延
原因 | 解決辦法 |
1.柱溫低; | 1.升高柱溫; |
2.樣品溶劑選擇不恰當; | 2.使用流動相作為樣品溶劑; |
3.樣品過載; | 3.降低樣品含量; |
4.色譜柱損壞; | 4.見A1、A2; |
C.峰分叉
原因 | 解決辦法 |
1.保護柱或分析柱污染; | 1.取下保護柱再進行分析;如果必要更換保護柱;如果分析柱阻塞,拆下來清洗;如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當的再生措施;如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。 |
2.樣品溶劑不溶于流動相; | 2.改變樣品溶劑;如果可能采取流動相作為樣品溶劑; |
D.峰變形
原因 | 解決辦法 |
1.樣品過載; | 1.減少樣品載量; |
E.早出的峰變形
原因 | 解決辦法 |
1.樣品溶劑選擇不恰當; | 1. a.減少進樣體積; b.運用低極性樣品溶劑; |
F.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因 | 解決辦法 |
1.柱外效應; | 1. a.調整系統連接(使用更短、內徑更小的管路); b.使用小體積的流通池; |
G.K’增加時,脫尾更嚴重
原因 | 解決辦法 |
1.二級保留效應,反相模式; | 1. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品); d.更換一支柱子; |
2.二級保留效應,正相模式; | 2. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入水(或多官能團化合物); d.試用另一種方法; |
3.二級保留效應,離子對; | 3.加入三乙胺(或堿性樣品); |
H.酸性或堿性化合物的峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1.緩沖不合適; | a.使用濃度50~100mM的緩沖液; b.使用P ka等于流動相pH值的緩沖液; |
I.額外的峰
原因 | 解決辦法 |
1.樣品中有其他組份; | 1.正常; |
2.前一次進樣的洗脫峰; | 2. a.增加運行時間或梯度斜率; b.提高流速; |
3.空位或鬼峰; | 3. a.檢查流動相是否純凈; b.使用流動相作為樣品溶劑; c.減少進樣體積; |
J.保留時間波動
原因 | 解決辦法 |
1.溫控不當; | 1.調好柱溫; |
2.流動相組分變化 | 2.防止變化(蒸發、反應等); |
3.色譜柱沒有平衡; | 3.在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱; |
K.保留時間不斷變化
原因 | 解決辦法 |
1.流速變化; | 1.重新設定流速; |
2.泵中有氣泡; | 2.從泵中除去氣泡; |
3.流動相選擇不恰當; | 3. a.更換合適的流動相; b.選擇合適的混合流動相; |
L.基線漂移
原因 | 解決辦法 |
1.柱溫波動;(即使很小的溫度變化都會引起基線波動;通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器;) | 1.控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器; |
2.流動相不均勻;(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移) | 2.使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑;流動相在使用前進行脫氣,使用中使用氦氣; |
3.流通池被污染或有氣體; | 3.用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸) |
4.檢測器出口阻塞;(高壓造成流通池窗口破裂,產生噪音基線) | 4.取出阻塞物或更換管子;參考檢測器手冊更換流通池窗; |
5.流動相配比不當或流速變化; | 5.更改配比或流速;為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速; |
6.柱平衡慢,特別是流動相發生變化時; | 6.用中等強度的溶劑進行沖洗,更改流動相時,在分析前用10~20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗; |
7.流動相污染、變質或由低品質溶劑配成; | 7.檢查流動相的組成;使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑; |
8.樣品中有強保留的物質(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出一個逐步升高的基線。 | 8.使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。 |
9.使用循環溶劑,但檢測器未調整。 | 9.重新設定基線;當檢測器動力學范圍發生變化時,使用新的流動相; |
10.檢測器沒有設定在大吸收波長處; | 10.將波長調整至大吸收波長處; |
M.基線噪音(規則的)
原因 | 解決辦法 |
1.在流動相、檢測器或泵中有空氣; | 1.流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣; |
2.漏液 | 2.見第三部分;檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。 |
3.流動相混合不* | 3.用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑 |
4.溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱) | 4.減少差異或加上熱交換器 |
5.在同一條線上有其他電子設備 | 5.斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。 |
6.泵振動 | 6.在系統中加入脈沖阻尼器 |
N.基線噪音(不規則的)
原因 | 解決辦法 |
1.漏液 | 1.見第三部分。檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。 |
2.流動相污染、變質或由低質溶劑配成 | 2.檢查流動相的組成。 |
3.流動相各溶劑不相溶 | 3.選擇互溶的流動相 |
4.檢測器/記錄儀電子元件的問題 | 4.斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。 |
5.系統內有氣泡 | 5.用強極性溶液清洗系統 |
6.檢測器內有氣泡 | 6.清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調節器 |
7、流通池污染(即使是極少的污染物也會產生噪音。) | 7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池 |
8.檢測器燈能量不足 | 8.更換燈 |
9.色譜柱填料流失或阻塞 | 9.更換色譜柱 |
10.流動相混合不均勻或混合器工作不正常 | 10.維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,建議不使用泵的混合裝置 |
O.寬峰
原因 | 解決辦法 |
1.流動相組成變化 | 1.重新制備新的流動相 |
2.流動相流速太低 | 2.調節流速 |
3.漏液(特別是在柱子和檢測器之間) | 3.見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 |
4.檢測器設定不正確 | 4.調整設定 |
5.柱外效應影響 a.柱子過載 b.檢測器對反應時間或池體積響應過大 c.柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大 d.記錄儀響應時間太長 | 5. a.小體積進樣(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀釋樣品 b.減少響應時間或使用更小的流通池 c.使用內徑為0.007~0.01的短管路 d.減少響應時間 |
6.緩沖液濃度太低 | 6.增加濃度 |
7.保護柱污染或失效 | 7.更換保護柱 |
8.色譜柱污染或失效,塔板數較低 | 8.更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強溶劑沖洗舊柱子。 |
9.柱入口塌陷 | 9.打開柱入口,填補塌陷或更換柱子 |
10.呈現兩個或多個未被*分離的物質的峰 | 10.選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 |
11.柱溫過低 | 11.提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃ |
12.檢測器時間常數太大 | 12.使用較小的時間常數 |
P.分離度降低
原因 | 解決辦法 |
1.流動相污染或變質(引起保留時間變化) | 1.重新配置流動相 |
2.保護柱或分析柱阻塞 | 2.去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞,可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在,進口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。 |
Q.所有的峰面積都太小
原因 | 解決辦法 |
1.檢測器衰減設定過高 | 1.減少衰減的設定 |
2.檢測器時間常數設定太大 | 2.設定較小的時間常數 |
3.進樣量太少 | 3.增大進樣量 |
4.記錄儀連接不當 | 4.使用正確的連接 |
R.所有峰面積都太大
原因 | 解決辦法 |
1.檢測器衰減設定過低 | 1.采取較大的衰減 |
2.進樣過多 | 2.減少進樣量 |
3.記錄儀連接不正確 | 3.正確連接記錄儀 |
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