稱取魚肉試樣2 g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，在垂直振蕩儀中以1 000 r/min振蕩5 min。然后，以10000 r/min離心5 min，將上清液轉入另一50 mL離心管中。對殘渣再加入15 mL乙腈，重復提取并離心一次，合并兩次上清液，并用氮氣吹干。加入3 mL 5%(體積分數)乙酸水溶液，渦旋1 min。用3 mL甲醇和3 mL水依次活化MCX萃取柱，取備用液過柱，用5 mL 5%(體積分數，下同)乙酸水溶液洗滌，抽干，再用5 mL 10%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，并在40 ℃下用氮氣吹干。用1.0 mL 20%乙腈水溶液溶解殘渣，通過0.22 μm濾膜過濾，待上機測試。

2.2實驗方法

V20垂直振蕩器，可以根據需要設置振蕩頻率，無需人工操作。比較提取5min振動頻率分別為500、800、1000、1200、1500 次/min的提取效率，每個頻率稱取3個平行質控樣，按照2.1樣品處理的方法進行樣品提取回收率試驗。圖1為不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率，從圖1中可以看出，當振動頻率高于1000次/min時，提取效率無明顯差別，因此提取頻率采用1000次/min。

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圖1   不同振蕩頻率提取的魚肉粉中地西泮殘留量回收率

比較超聲提取法、渦旋提取法和全自動垂直振蕩儀提取法對質控樣中地西泮提取的提取回收率，提取時間分別為5、10、15、20、30 min。按照2.1樣品處理的方法進行樣品提取回收率試驗。圖2為三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率，從圖2可以看出，超聲法提取效率較低，可能是塑料離心管阻礙了超聲波的傳遞，渦旋法提取效率次之，全自動垂直振蕩提取法效率非常高。綜合以上，選擇全自動垂直振蕩提取法，以實現批量操作，省時省力，操作簡單。

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圖2   三種不同提取方式的魚肉粉中地西泮回收率