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PCR 儀(Veriti 96-Well)使用說明
操作步驟:
1. 打開 PCR 儀的熱蓋,插入 0.2 ml 的樣品管,蓋好熱蓋。打開 PCR 儀的電源,儀器程序 開始初始化,需等待幾分鐘。初始化完成后,顯示主菜單,點“Browse/New Methods” , 進入 PCR 程序列表。
2. 可以直接點一個 PCR 程序,選擇“Start Run”運行;點右邊的符號,可以選擇不同的文 件夾。如要新建一個 PCR 程序,點“New” ,出現(xiàn) PCR 程序。
3. 添加一段程序:點中上方的“Stage”位置,該位置變紅;再點“Add” ,軟件將加入一 段新的程序。修改循環(huán)數(shù)、溫度、時間:點中循環(huán)次數(shù)、溫度或時間位置,下方出現(xiàn)數(shù) 字鍵。依次點數(shù)字鍵,出現(xiàn)合適數(shù)字后,點“Done”確定。
4. 增加一個步驟:點“Step”位置,該位置變紅;再點“Add” ,軟件將加入一個新的步驟; 刪除一個步驟:點“Step”位置,在點“Delete” ,軟件將該步驟刪除。
5. 建立梯度模式: 點中一個步驟, “Option” 在出現(xiàn)的選項中, “VeriFlex step” 再點 鍵, 點 , 出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口:輸入 6 個梯度溫度,溫度下方的“1-2”是指對應(yīng)的 1、2 兩行加 熱孔, 全部輸好后, “Done” 點 確定。 注意: 相鄰的兩個梯度溫度之差大不能*過 5℃ !
6. 建立漸變模式: 點中一個步驟,再點“Option”鍵,在出現(xiàn)的選項中,點“Auto Delta” , 出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口。點“Staring Cycle” ,輸入起始循環(huán)數(shù);點“Delta Temperature” , 輸入溫度變化值;點“Delta Time” ,輸入時間變化值。
7. 增加暫停步驟:點中一個步驟,再點“Option”鍵,在出現(xiàn)的選項中,點“Pause” ,輸 入暫停的起始位置,暫停間隔和暫停時間,點“Done”確定。
8. 編輯 PCR 程序完成后,點“Save”保存。點“Run Method” ,輸入 PCR 程序名稱,選擇 保存 PCR 程序的文件夾, 再輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度 (這兩項在運行程序時可以修改) , 點“Saveδ Exit”確定。
9. 回到 PCR 程序列表界面,選擇新建的 PCR 程序。點“Start Run” ,出現(xiàn)運行參數(shù)設(shè)置窗 口輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度,點“Start Run Now”開始運行 PCR 程序。
10.儀器運行選中的 PCR 程序,顯示運行監(jiān)視窗口。
11. 暫停運行: 點“Pause Run” ,儀器暫停,出現(xiàn)暫停選項欄“Remaining Time”顯示 暫停剩余時間, “Elapse Time”顯示已暫停時間。如果需要修改暫停時間,輸入時間值, 點“Done”確定;點“Resume Run” ,結(jié)束暫停,繼續(xù)運行 PCR 程序。
12.終止運行:點“Stop”可以終止整個 PCR 程序。
13.反應(yīng)報告: PCR 程序結(jié)束后,儀器會自動生成反應(yīng)報告,顯示當次反應(yīng)的各項指數(shù)。 該報告可以保存和打印。
14.PCR 反應(yīng)結(jié)束后,打開熱蓋,取出樣品,關(guān)閉儀器電源。并開蓋放置,使熱蓋和加熱 模塊正常降溫。
儀器名稱 | Veriti 96孔多重控溫梯度PCR儀 | |
廠家 | 美國Applied Biosystems公司 | |
主要規(guī)格及技術(shù)指標 | 1. 溫度范圍:4.0℃-99.9℃; 2. 溫度顯示:顯示經(jīng)計算機計算的樣品實際溫度,到0.1℃; 3. 升降溫速度:升降溫速度=3.9℃/秒,樣品實際平均溫度變化速度3.35℃/秒; 4. 6個溫控模塊用于PCR優(yōu)化,區(qū)域間溫度差異大可以達到5℃,整板溫差可以達到25℃; 5. 溫度均一性:<±0.5℃(20秒后到達95℃); 6. 溫度性:±0.25℃(35-99.9℃);高靈敏度低溫EMCCD,制冷溫度低于-25℃; | |
主要功能及應(yīng)用范圍 | 用于聚合酶鏈式反應(yīng) (Polymerase Chain Reaction, PCR),擴增特定的DNA片段。
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