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當(dāng)前位置:上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司>>技術(shù)文章>>二氧化碳培養(yǎng)箱消毒與維護(hù)
二氧化碳培養(yǎng)箱中的微生物往往會對培養(yǎng)的結(jié)果產(chǎn)生一定的影響,常見的微生物處理方式包括物理過濾和滅菌,下面讓我們一起來探討兩種方式。
1.1 物理過濾 將箱體內(nèi)氣體通過過濾器循環(huán),使箱體內(nèi)氣體潔凈度達(dá)到一定的級別(常見UPLA過濾器為1級、HEPA 過濾器為 100 級);主要作用是保持箱體內(nèi)潔凈度,保證培養(yǎng)箱體內(nèi)的環(huán)境,但對微生物及病毒不起到任何的殺滅作用,僅僅是將箱體內(nèi)的微生物過濾到過濾器內(nèi),這樣需要對過濾器進(jìn)行定期更換,采用物理過濾的培養(yǎng)箱更適合于環(huán)境條件較好的實(shí)驗(yàn)室。
1.2 滅菌 殺滅或清除傳播媒介上的所有微生物(包括芽胞),使之達(dá)到無菌程度。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”,培養(yǎng)箱內(nèi)的無菌處理是指殺滅所謂微生物、病毒等,*避免環(huán)境對樣本的影響,以及消除不同樣本之間的交叉污染。根據(jù)不同的去除對象以及應(yīng)用環(huán)境需求,采用有效的方法。
1.2.1 微生物分類
根據(jù)微生物的抵抗能力不同,可將微生物分為如下幾類:
① 細(xì)菌繁殖體 易被一般的消毒劑殺滅,一般革藍(lán)氏陽性細(xì)菌對消毒劑較敏感,采用化學(xué)消毒效果較為明顯; 革藍(lán)氏陰性桿菌則常有較強(qiáng)的抵抗力,一般的化學(xué)消毒效果不明顯,但對熱敏感,采用熱力學(xué)方法效果明顯。
② 細(xì)菌芽孢和真菌芽胞 有厚厚的孢子壁,對化學(xué)消毒劑有較強(qiáng)的抵抗力,一般的化學(xué)消毒對芽孢效力有限;消毒能力強(qiáng)的化學(xué)試劑對芽孢有一定的殺滅作用,但對濃度、處理方法等要求嚴(yán)格;常見的方法是采用熱力學(xué)方法。
③ 病毒 種類較多,不同病毒種類對外界的抵抗能力不同,化學(xué)試劑消毒的效果也不相同,RNA活性受溫度影響明顯,一般采用熱力學(xué)方法去除。
④ 真菌 普遍對環(huán)境抵抗能力強(qiáng),一般的紫外消毒方式和化學(xué)試劑消毒達(dá)不到預(yù)期的效果,通常采用熱力學(xué)方法處理,煮沸或使用高壓滅菌燈。
1.2.2 熱力學(xué)滅菌方法
培養(yǎng)箱內(nèi)常見的熱力學(xué)滅菌方法包括干熱滅菌和濕熱滅菌。
①干熱滅菌 將箱體內(nèi)加熱到120℃以上,濕度為20% 以內(nèi),持續(xù)一定的時間,通過高溫使蛋白質(zhì)及核酸變性失活,達(dá)到殺滅的目的。有些真菌芽孢,由于厚厚的細(xì)胞壁保護(hù),能夠抵抗一定的高溫,滅菌不能*。
②濕熱滅菌 在高溫的同時保持箱體內(nèi)飽和濕度,達(dá)到*滅菌效果。
濕熱滅菌相比于干熱滅菌,主要優(yōu)點(diǎn)是:
①濕熱滅菌中的菌體吸收水分,蛋白質(zhì)含水量增高,所需凝固溫度降低,易凝固變性;
②高溫水蒸汽對蛋白質(zhì)有*的穿透力,從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡;
③蒸汽有潛熱存在,能迅速提高菌體的溫度,從而增加滅菌效力。
由此可見,培養(yǎng)箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果的滅菌方法,能*消滅細(xì)菌、真菌、孢子、病毒等微生物且沒有二次污染。一個季度采用一次高溫滅菌,消除潛在的污染風(fēng)險(xiǎn)。
PART 2/二氧化碳培養(yǎng)箱維護(hù)
居安思危,防患于未然,是智者避免災(zāi)禍的良方,是降低損失的措施。二氧化碳培養(yǎng)箱的日常維護(hù)就是良方,做好以下幾個方面可以大大降低污染的概率:
2.1 重視管理 安全為目的,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對實(shí)驗(yàn)環(huán)境的重要性。定期對系統(tǒng)進(jìn)行校正,至少每年一次。各項(xiàng)數(shù)值一旦固定后,不要隨意調(diào)節(jié),以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動,降低機(jī)器的靈敏度,同時還會影響培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。
2.2 規(guī)范操作 必須穿著實(shí)驗(yàn)服,換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實(shí)驗(yàn)操作時必須配帶一次性手套,特別是打開培養(yǎng)箱前,必須先用75%的酒精噴洗雙手,再取出培養(yǎng)箱中的細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后,再放回培養(yǎng)箱時,同樣也要先噴酒精消毒。培養(yǎng)箱的兩個門開關(guān)取(放)物要迅速,否則會影響CO2的濃度、溫度和濕度,造成污染。切記開門時不要對著培養(yǎng)箱說活,大口呼吸甚至是打噴嚏。
2.3 清潔 去除灰塵、污垢和有機(jī)污漬。粉塵、污物以及有機(jī)物是微生物的棲身之所,并可能影響除污染劑(抗菌劑、化學(xué)殺菌劑以及消毒劑)的作用,必須先經(jīng)過清潔才能實(shí)現(xiàn)消毒和滅菌的目的。
2.4 消毒抑菌 醫(yī)用酒精可以很好地起到消毒作用,日常可使用75%的酒精對培養(yǎng)箱主體和內(nèi)部進(jìn)行擦拭,一個月一次即可。培養(yǎng)箱內(nèi)部可以放置2%~10%的硫酸銅溶液,硫酸銅溶液具有一定的殺菌抑菌效果。
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