ABI7500快速型實時定量PCR儀是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環,熒光檢測和各種應用分析軟件結合在一起,可以動態觀察PCR每一循環各反應管中PCR擴增產物逐漸增加的情況。PCR實驗結束后可以馬上得到定量結果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產物,無需進行任何實驗操作。7500型實時熒光定量PCR儀采用96孔反應板或單個及8聯管,反應體積25-100微升,實驗可以在不到2小時內結束。與其他人工基因定量分析方法如NorthernblottingorRNase-protectionassays相比,7500型實時熒光定量PCR系統具有時間省,靈敏度高,準確性好和線性范圍寬等優點。7500型實時熒光定量PCR系統由實時定量PCR技術的*—美國應用生物系統公司于2004年1月推出,它質量優異,實驗結果準確可信,性能價格比極其*。
實時定量PCR應用廣泛,包括基于相對定量分析的基因表達分析,以標準曲線為基礎的病原體定量分析,定性的PCR擴增后核酸序列的SNP基因型分析,以及以陽性內對照為基礎的陽性/陰性結果判定
?五色熒光檢測,應用更廣泛全面,包括:基因表達分析,病原體定量分析,SNP基因型分析以及以陽性內對照為基礎的陽性/陰性結果判定
?新型光路設計支持更多的熒光標記檢測,包括:FAM?/SYBR?GreenI,VIC?/JOE,NED?/TAMRA?/Cy3?,ROX?/TexasRed?,和Cy5?;
更好的激發光源設計使長波長紅色熒光的檢測靈敏度大大提高
?強大而靈活的反應板設置指南軟件使反應板設置非常方便,良好的實驗結果顯示與自動分析工具使實驗數據的分析處理更簡單直觀
?型半導體熱循環系統支持96孔板和單一0.2ml反應管。
?將來可以升級至超速定量PCR反應模式,大大縮短定量PCR反應時間
?體積小,采用手提電腦或臺式電腦,適用于任何空間的實驗室。
快速熱循環
7500型實時熒光定量PCR系統的標準模式采用25-100微升反應體積,可以采用96孔板或單管/8聯管進行實驗反應。另外7500還可以升級為快速熱循環樣品基座,該升級為選購件,由AB公司工程師負責安裝。快速熱循環樣品基座采用新型96孔反應板,這種反應板的管內液體上方的空間較小,可以支持5-30微升反應體積的實驗。采用樣品基座升級后的7500,新型96孔反應板和新型快速熱循環定量PCR預混試劑,實時定量PCR實驗可以在40分鐘內完成,實驗效果與標準2小時模式**。
7500型實時熒光定量PCR系統軟件采用WindowsXP?操作系統,進行儀器控制,數據收集和數據分析,軟件功能強大,界面友好,包括如下特色:
*反應板設置指南,使實驗設計非常簡單,即使是復雜的多重定量實驗也是如此。
*擴增反應曲線的實時監測
*自動設定熒光基線,自動計算熒光閾值使實驗結果分析大大簡化
*采用標準曲線進行靶基因的定量
*基因表達相對定量軟件提供強大的結果分析顯示,可以自動將多達10塊96孔板基因表達實驗的數據同時分析,并自動去除無關項數據,該軟件為選購件
*自動SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結果并自動進行分型質量評分
*解離曲線數據采集操作簡單觀察方便,可以在儀器運行時觀察解離曲線數據
*觀察實時擴增曲線時可以非常方便的標定所對應的樣品孔位置
*光源使用時間監測及儀器系統自我診斷程序
熒光信號檢測:
ABI7500快速型實時熒光定量PCR系統的全部96個樣品孔采用同一鹵鎢燈作為光源,鹵鎢燈光通過五色光源濾光片后激發每一個分析樣品。鹵鎢燈光源增加光源濾光片后改善了長波長紅色熒光標記的激發效果,可以大大提高紅色熒光檢測的靈敏度和定量分析的準確性。激發后的熒光再通過五色熒光濾光片到達CCD照相機檢測信號。五色熒光濾光片能夠有效地分辨包括:FAM?/SYBR?GreenI,VIC?/JOE,NED?/TAMRA?/Cy3?,ROX?/TexasRed?和Cy5?在內的多種熒光染料。
儀器性能:
7500型實時熒光定量PCR系統經過驗證可以達到如下性能目標:
?9個數量級的線性范圍
?可以檢測50ul反應體積單一報告熒光TaqMan實驗中僅10個起始拷貝數的模板,其置信度高達99.7%
試劑與消耗品:
7500型實時熒光定量PCR系統可使用全套定量PCR試劑與消耗品,包括:TaqMan?PCR通用預混試劑,SYBR?GreenI預混試劑,96孔反應板及0.2ml反應管
TaqMan?Assays-on-Demand?andTaqMan?Assays-by-Design?應用試劑盒:
美國應用生物系統公司為7500型實時熒光定量PCR系統提供各種配套的TaqMan定量PCR應用試劑盒,這些試劑盒均經過嚴格的質量控制,可以拿來直接使用。