“八連排一打開就飛濺,樣本全灑了!”
“蓋子蓋不穩,P出來時已揮發......"
想要 PCR 一次做成,避免 PCR 管帶來的「尷尬情況」?首先要學會 PCR 管的選用,一款「高清、穩定、有數字、體積合適」的 PCR 管真的可以帶你逃離社死現場。本文整理 3 個 tube 選擇維度,帶你挑選適合的那個。
根據樣本數量,選擇 3 種 tube
01 少量樣本如何選管?
首先可以考慮實驗通量,根據樣品數量選擇耗材。少量樣品的實驗可以選擇 PCR 單管、八聯管或十二聯管,減少耗材的消耗。
>>>PCR 單管: 獨立管+獨立蓋子的組合,相對于 PCR 聯管和 PCR 板更能確保樣品的獨立性,避免樣品之間發生交叉污染,適合在樣品量非常少的時候使用。
>>>PCR 聯管: 常見的 PCR 聯管有八聯管和十二聯管,在處理樣品數量稍多一些的實驗時,比 PCR 單管更具有操作的便捷性。出于避免樣品污染或者方便 PCR 產物回收的考慮,可以選擇每一個管子帶獨立蓋子的 PCR 聯管。
02 大量樣本可選「孔板」
如果樣品數量多,那么為了方便批量操作,可以根據樣品數量挑選 24 孔、48 孔、96 孔或 384 孔的 PCR 板。在挑選 PCR 板的時候,需要額外考慮 PCR 板的切角和裙邊設計。有了這兩個「助手」,加樣順序就能一目了然,避免眼花繚亂。
>>>切角:一般用 PCR 板的數字字母組合定位,PCR 板上 8 個行常用大寫英文字母表示,12 個列則用阿拉伯數字表示。故而切角位置在 A12 代表 96 孔 PCR 板的右上角位置有倒角設計。
>>>裙邊:是在 PCR 孔口所在平面的基礎上向上或向下延伸的垂直邊緣。沒有垂直邊緣就是無裙邊,垂直邊緣向上延伸稱為升裙邊,垂直邊緣向下延伸又可以分為兩種情況——邊緣向下延伸到底的稱為全裙邊,邊緣向下延伸但不到板底的稱為半裙邊。
根據反應體系,選 tube 容量
其次,可以考慮反應體系大小進行選擇。各類 PCR 耗材還有常規容量和低容量之分,對于樣品珍貴稀少,或者所需反應體系較小的 PCR 實驗可以用低容量的 PCR 耗材來降低樣品和試劑的用量。
根據目的,選「凸蓋」或「聯蓋」
還可以從實驗目的出發考慮。普通 PCR 實驗選擇凸蓋的 PCR 管或聯蓋,更有利于保持 PCR 耗材在實驗過程中的形狀穩定性,防止管口和孔口在經歷劇烈溫度變化時因為形變而導致樣品蒸發。
qPCR 實驗則一定需要選擇平蓋的 PCR 管或聯蓋以確保熒光透過率,必要時也可以選擇用高透明度的封板膜進行批量密封。最后,白色孔的 PCR 耗材能夠在更短時間內完成 qPCR 的熒光定量。
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PCR 實驗已經是生物實驗室的基礎實驗之一,小伙伴們日復一日配制的 PCR 體系充滿了枯燥又辛苦的重復勞動。
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