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酶聯免疫吸附實驗直接法和間接法優缺點
因為ELISA酶聯免疫吸附實驗具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。已成為分析化學領域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法。
elisa可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);
(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結合物"(conjugate);
(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不類型的檢測方法。
elisa可根據抗原抗體的結合情況來分類為以下兩種方法。
直接法(direct elisa)
將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。
優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。
缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。
間接法(indirect elisa)
此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它zui多的免疫反應性。
缺點:交互反應發生的機率較高。
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