液相色譜法測(cè)定飼料中磺胺喹惡啉方法研究

廣泛用于養(yǎng)禽業(yè)，磺胺喹惡啉屬磺胺類(lèi)抗生素兼有抗球蟲(chóng)作用。其口服后吸收迅速，但排泄緩慢，殘留在組織器官及雞蛋中時(shí)間長(zhǎng)，人食用后，對(duì)人體發(fā)生耐藥性等副作用。世界衛(wèi)生組織（WHO規(guī)定動(dòng)物組織、奶的zui高殘留*（MRL值為100μg/kg日本等國(guó)規(guī)定肉雞中不得檢出。因此，該藥的使用應(yīng)嚴(yán)格控制用藥期及用藥量，以保證產(chǎn)品的平安及對(duì)外貿(mào)易疏通。

磺胺喹惡啉純品為粉末，據(jù)英國(guó)獸藥典記載。幾乎無(wú)味，不溶于水，溶于甲醇、乙醇，易溶于堿性溶液。目前，飼料中磺胺喹惡啉的檢測(cè)方法美國(guó)AOA C規(guī)范是采用分光光度法，該法要求含阿散酸及不含阿散酸的飼料采用兩種不同的測(cè)定方法。而國(guó)內(nèi)飼料目前添加組分較復(fù)雜，檢測(cè)者對(duì)飼料情況是未知的難以確定用哪一個(gè)方法；且該方法中需要重氮化試劑做偶合反應(yīng)，其毒性大，對(duì)操作者及環(huán)境 都會(huì)造成危害。因此，沒(méi)有采用該法。另外，還有文獻(xiàn)報(bào)道用氣相色譜法測(cè)定，中間仍需重氮化衍生。zui終選用液相色譜法。

1.測(cè)定方法

離心，過(guò)濾，HPLC儀上分離,1.1原理 用甲醇水溶液提取飼料中的磺胺喹惡啉。紫外檢測(cè)器240nm處測(cè)定。

1.2試劑和溶液

除特別注明外均為分析純?cè)噭凰疄檎麴s水，以下所用的試劑。色譜用水符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

1.2.1磺胺喹惡啉標(biāo)準(zhǔn)品：含磺胺喹惡啉（C14H12N4O2S95.0％。

1.2.2甲醇：色譜純。

1.2.3磷酸鹽溶液：取磷酸二氫鉀3.40g和磷酸氫二鉀5.71g加水溶解并稀釋至1000mL

置4℃冰箱中避光保存，1.2.4磺胺喹惡啉標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取磺胺喹惡啉（4.150mg溶于甲醇并稀釋成0.1mg/mL貯藏液。有效期1個(gè)月。臨用前，取此貯藏液用水稀釋成適當(dāng)濃度的規(guī)范工作液。

1.2.5提取液：甲醇100mL＋水50mL

1.3儀器

1.3.1實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備

1.3.2液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）

1.3.3分析天平：感量為0.0001g和0.001g

1.3.4旋渦振蕩器

1.3.5離心機(jī)：4000r/min

1.3.6針頭過(guò)濾器：備孔徑為0.45μm微孔濾膜

1.4分析方法

1.4.1提取

至0.001g加入提取液（4.550mL旋渦振蕩器混勻，稱(chēng)取5g試樣。超聲水浴中提取15min中間取出搖動(dòng)1次，然后4000r/min離心5min靜置，取上清液過(guò)0.45μm濾膜，供液相色譜測(cè)定。

1.4.2規(guī)范曲線的制備

用水或流動(dòng)相稀釋成濃度分別為0.100.501.002.0010.0μg/mL磺胺喹惡啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，準(zhǔn)確吸取貯藏液適量。做出規(guī)范曲線。

1.4.3測(cè)定

1.4.3.1色譜條件

色譜柱：C18柱 柱長(zhǎng)150mm柱內(nèi)徑4.6mm粒度5μm或性能相當(dāng)者。

并超聲脫氣。流動(dòng)相：磷酸鹽溶液75mL＋甲醇25mL用前過(guò)0.45μm濾膜。

流速：1mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm

進(jìn)樣量：1020μL

1.4.3.2定性與定量

定量由規(guī)范曲線或單點(diǎn)校準(zhǔn)。根據(jù)規(guī)范品的保管時(shí)間定性。

1.4.4結(jié)果的計(jì)算

每千克試樣中含磺胺喹惡啉的質(zhì)量按下式公式計(jì)算：

m1

x=D

m

x每千克試樣中磺胺喹惡啉的質(zhì)量（mg

m1拖尾峰（tailing peak）。前者少見(jiàn)。>色譜峰面積對(duì)應(yīng)的磺胺喹惡啉的質(zhì)量（μg

D稀釋倍數(shù)；

m所稱(chēng)樣品的質(zhì)量（g

保管至小數(shù)點(diǎn)后1位。平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示。

2.結(jié)果與討論

2.1色譜條件的確定

而磺胺喹惡啉在該體系下出峰時(shí)間是56min影響檢測(cè)效率。改用磷酸鹽/甲醇體系做流動(dòng)相。大多數(shù)磺胺類(lèi)藥物常以磷酸/乙腈體系做為流動(dòng)相。

磺胺喹惡啉的保管時(shí)間發(fā)生了變化。通過(guò)改變磷酸鹽和甲醇的比例。

磷酸鹽 :甲醇 磺胺喹惡啉保留時(shí)間 min

70:304.86

75:257.80

80:2012.32

出峰晚影響檢測(cè)效率，出峰早磺胺喹惡啉與雜質(zhì)峰相互干擾。峰形變寬。磷酸鹽與甲醇比例75:25較為合適。

2.2方法線性與zui小檢出限

對(duì)5.010.020.0100.0mg/kg添加濃度按上述方法測(cè)定。

添加濃度（mg/kg5.010.020.0100.0

基線構(gòu)成之面積稱(chēng)峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積 3590671684122536771414

線性方程為：y=7821.813601.6

相關(guān)系數(shù)為：r=0.9992

方法zui小檢出濃度為5.0mg/kg磺胺喹惡啉的使用劑量雞配合飼料是60g/t能夠檢出低于用量10倍濃度已能滿(mǎn)足檢測(cè)需要。