SEC色譜柱是利用多孔凝膠固定相的*性產生的一種,主要根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關系而對溶質進行分離的分析的方法。適用于對未知樣品的探索分離,它能很快提供樣品按分子大小組成的全面情況,并迅速判斷樣品是簡單的還是復雜的混合合物,并提供樣品中各組分的近似分子量。
下面為大家介紹下SEC色譜柱的分離機理:
1、主要取決于凝膠的孔徑大小與被分離組分分子尺寸之間的關系,與流動相的性質沒有直接的關系。
2、樣品分子與固定相之間不存在相互作用,色譜固定相是多孔性凝膠,僅允許直徑小于孔徑的組分進入,這些孔對于溶劑分子來說是相當大的,以致溶劑分子可以自由的擴散出入。樣品中的大分子不能進入凝膠孔洞而*被排阻,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先從柱中被流動相洗脫出來;中等大小的分子能進入凝膠中一些適當的孔洞中,但不能進入更小的微孔,在柱中受到滯留,較慢地從色譜柱洗脫出來;小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強的滯留,會更慢的被洗脫出;溶解樣品的溶劑分子,其分子量最小,可進入凝膠的所有孔洞,最后從柱中流出,從而實現具有不同分子大小樣品的*分離。在分子排阻色譜法中,溶劑分子從柱中流出,這一點明顯不同于其他液相色譜法。
3、在SEC中,不同尺寸樣品分子的分布系數K總保持在0~1之間。K=0說明溶質*被排除在填料孔外,稱為全排斥,即填料的排斥極限;K=1說明溶質可*進入填料孔內。稱為全滲透,即填料的滲透極限。
4、對與某一大小分子其洗脫一體積等于流動相體積與該尺寸溶質可以滲透進入空洞內部的那部分體積的總和
希望上述內容能夠幫助大家更好的了解本產品。
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