瓊脂糖凝膠純化回收試劑盒

Midi Purification Kit

產(chǎn)品信息：

試劑盒組成 保存      DH101-01      DH101-02

                       100 次       200 次

溶膠液 DD 室溫  50ml         100ml

                  25ml          25ml×2

漂洗液 WB 室溫   *次使用前按說(shuō)明加量乙醇

洗脫緩沖液 EB 室溫 15ml 15ml

吸附柱 EC 室溫 100 個(gè) 200 個(gè)

收集管（2ml） 室溫 100 個(gè) 200 個(gè)

產(chǎn)品介紹：

在高離序鹽存在的情況下，DNA的片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟，漂洗

液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，最后用低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化納和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。

3.溶膠液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè) pH 值變化從而達(dá)到較理想結(jié)合效果，大大提高回收效率。注意事項(xiàng):

1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫。

2.儲(chǔ)存于低溫（4℃或者-20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃-25℃）進(jìn)行。

3.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

4.溶膠液中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.回收純化的DNA的片段一般在100bp到40kb之間，過(guò)長(zhǎng)、過(guò)短片段的回收效率降低。

6.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脫體積、DNA的片斷大小有關(guān)。一般1-20μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高達(dá)85%-95%。

7.切膠回收時(shí)，紫外燈觀察對(duì)DNA的片段有損壞作用，應(yīng)該盡可能使用能量低的長(zhǎng)波紫外線，并且盡可能的縮短紫外線下處理的時(shí)間。

8.pH值≤7.5時(shí)，吸附膜吸附DNA的效率最高。如果切下來(lái)的凝膠中含有電泳緩沖液太多，造成溶膠后溶膠液pH偏高，會(huì)導(dǎo)致回收率降低。溶膠后，如果溶膠液依舊保持黃色，說(shuō)明pH正常；如果變成橘紅色或者淡紫色，說(shuō)明pH偏高，可在膠充分溶解后加5-10μl 3M醋酸鈉（pH5.2）將pH值調(diào)到5-7（黃色）。

9.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保pH大于7.5， pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA的片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA片段如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

自備試劑：無(wú)水乙醇操作步驟：

提示：*次使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入量無(wú)水乙醇，加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1.在長(zhǎng)波紫外燈下，用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠，得到凝膠體積越小越好。

2.將切下的含有DNA條帶凝膠放入 1.5ml離心管，稱重。

3.加3倍體積溶膠液DD。（凝膠重為 100mg，則加入300μl溶膠液）

如果凝膠濃度大于 2％，應(yīng)加入6倍體積溶膠液。

4.56℃水浴放置 10min（或直至膠*溶解）。每 2-3min 渦旋震蕩一次加速溶解。

5.可選,：每 100mg最初的凝膠重量加入150μl的異丙醇，震蕩混勻。

6.將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置 1min，12,000rpm離心30-60sec，倒掉收集管中的廢液。

7.加入500μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12,000rpm離心 30sec，棄掉廢液。

8.重復(fù)操作步驟 7。

9.將吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm 離心 2min，盡量去除漂洗液，以免漂洗液中殘留的乙醇抑制下游反應(yīng)。

10 取出吸附柱 EC，放入一個(gè)干凈的離心管中，室溫放置數(shù)分鐘。

11.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置2min，12,000rpm離心

1min。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心 1min。(注意：洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過(guò)少影響回收效率)