PCR 產(chǎn)物純化回收試劑盒

quick Midi Purification Kit

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹：

在高離序鹽存在的情況下，DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2. 使用了結(jié)合液，不含傳統(tǒng)結(jié)合液的碘化納鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。

3. 結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于監(jiān)測 pH 值變化從而達(dá)到理想結(jié)合效果，大大提高回收效率。

4. 簡單快速、使用方便。

注意事項(xiàng):

1. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應(yīng)該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清,使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫.

2. 儲存于低溫（4℃或者-20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

4. 結(jié)合液中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5. 回收純化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之間，過長、過短片段的回收效率迅速降低。

6. 回收 DNA 的量和起始 DNA 的量，洗脫體積，DNA 片斷大小有關(guān)。一般 1-20μg， 100bp-5kb 的DNA 片段，回收率可達(dá) 95%。

7. pH 值≤7.5 時，吸附膜吸附 DNA 的效率高。如果待純化產(chǎn)物含有堿性物質(zhì)過多，造成和結(jié)合液混和后pH 偏高，會導(dǎo)致回收率降低。混和后，如果結(jié)合液依舊保持黃色，說明 pH 正常；如果變成橘紅色或者淡紫色，說明 pH 偏高，可加 5-10μl 3M 醋酸鈉

（pH5.2）將 pH 值調(diào)到 5-7（黃色）。

洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA， 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA 片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA 片段如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。

自備試劑：無水乙醇
操作步驟：

提示：次使用前請先在漂洗液 WB 中加入量無水乙醇，加入后請及時打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 每 100μl PCR 擴(kuò)增后體系或者酶切后體系加入 500μl 結(jié)合液 BB，充分混勻。（如果初始體系小于 100μl，請事先用雙蒸水調(diào)整至100μl）。

2. 將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中（吸附柱放入收集管中），室溫放置 1min，12,000rpm 離心 30-60sec，倒掉收集管中的廢液。

3. 加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm  離心 30sec，棄掉廢液。

4. 重復(fù)操作步驟 3。

5. 將吸附柱 EC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2min，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

6. 取出吸附柱 EC，放入一個干凈的離心管中，室溫放置數(shù)分鐘。

7. 在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置 2min，12,000rpm  離心1min。如果需要較多量 DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心 1min。(注意:洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要DNA 濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是小體積不應(yīng)少于 30μl，體積過小降 DNA 洗脫效率，減少產(chǎn)量。)

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