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北京西美杰科技有限公司
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- 2024-12-01 21:00:07
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- 2024年12月1日--2025年6月1日
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關(guān)鍵詞：Tomlinson I + J；人造文庫；SCFV；噬菌體展示技術(shù)
Greg Winter'的實驗室在MRC分子生物學(xué)實驗室和MRC蛋白質(zhì)工程中心（英國劍橋）構(gòu)建了多種人造抗體文庫，這些抗體文庫可通過噬菌體展示和篩選技術(shù)誘導(dǎo)結(jié)合幾乎所有的靶分子。目前這些噬菌體文庫已經(jīng)在很多分子生物學(xué)實驗室成功使用，可在大量不同的蛋白，多肽，小分子復(fù)合物中誘導(dǎo)出特異性抗體反應(yīng)物。
單鏈抗體（single—chain antibody fragment，scFv）由抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過15～20個氨基酸的短肽（linker）連接而成。 Fv分子，因抗體分子量較大，在體內(nèi)的穿透力差，不易進入組織中發(fā)揮作用，而用基因工程手段構(gòu)建更小的具有結(jié)合抗原能力的抗體片段（Fv分子或單鏈蛋白），可避免這一限制。
此外，肽鏈連接物還可將藥物、毒素或放射性核素與單鏈抗體蛋白相融合，可用于臨床診斷（成像檢查）和治療。
Tomlinson I + J文庫，該文庫包含有一億個不同的重組單鏈抗體基因片段（SCFV片段包含一個單個多肽區(qū)域包含有VH和VL區(qū)域，由可變的甘氨酸絲氨酸區(qū)域鏈接），克隆到噬菌粒載體并轉(zhuǎn)化到TG1 E. coli 細胞。通過噬菌體展示技術(shù)獲得大量的特異性重組抗體，可用于各種傳統(tǒng)免疫學(xué)實驗。 噬菌體展示技術(shù)將表型和基因型一起，將識別相應(yīng)抗原和進行再擴增的能力結(jié)合起來，不經(jīng)過人體免疫，通過幾輪“吸附-洗脫-擴增”的體外篩選富集過程，即可得到人源的基因工程抗體。
Tomlinson I + J文庫，源于單一的具有側(cè)鏈多異性的VH （V3-23/DP-47 and JH4b）和Vκ（O12/O2/DPK9 and Jκ1）框架 ，側(cè)鏈多樣性具有和已知結(jié)構(gòu)的抗原位點結(jié)合，在成熟的體系中具有很高的多樣性。由這個框架（VH: 1-3, Vκ: 2-1-1）來編碼的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)是目前人抗體技術(shù)體系中zui普通的。它在能夠形成抗原結(jié)合表面的前提下，重鏈的CDR3設(shè)計的盡可能短。該文庫以噬菌粒/SCFV的形式，經(jīng)過與蛋白A和蛋白L的結(jié)合進行篩選，在未知篩選的克隆序列的情況下進行篩選和并具有成熟的免疫親和力。由于多樣性好，庫容量大，所以可篩選到較高的高親和力抗體。
Tomlinson I
構(gòu)建在plT2載體（（HIS myc 標(biāo)簽），多樣化的側(cè)鏈主要是來自于原始體系中多樣性的位點（一共18個殘基，H50, H52, H52a, H53, H55, H56, H58, H95, H96, H97, H98, L50, L53, L91, L92, L93, L94 and L96）此文庫經(jīng)過篩選后與突變的多樣性體細胞共同作用使其成熟。
Library size （with insert）: 1.47 x 108
Percentage insert: 96%
Tomlinson J
和上述Tomlinson I描述相似，增添了NNK 側(cè)鏈。
Library size （with insert）: 1.37 x 108
Percentage insert: 88%
英國Source Bioscience （Geneservice）與多個科研機構(gòu)（如NIH、NKI、Sanger等）建立合作關(guān)系，擁有zui大的cDNA、基因組、噬菌體展示、microRNA、siRNA、shRNA與MGC收藏庫，涉及物種包括人、小鼠、大鼠、牛，以及各種模式動物如線蟲、斑馬魚、果蠅、原雞、爪蟾等，產(chǎn)品達1600多萬種。（Tomlinson I + J）是Source Bioscience提供的較為成熟的一個文庫，除此之外，還有優(yōu)于此文庫的DAb library，以及ATLAS scFV library。
更多產(chǎn)品可點擊 Source Bioscience查詢具體信息。
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