北京西美杰科技有限公司
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更新時間:2022-07-20 09:36:44瀏覽次數(shù):506
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什么是支原體?
支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑 0.2μm)并獨(dú)立生活的微生物,沒有細(xì)胞壁,表面由胞質(zhì)膜構(gòu)成,約有 1%的支原體可通過濾菌器。支原體污染細(xì)胞后,培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁,多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著。細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解,因此易被忽視。但個別嚴(yán)重者,可致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體污染細(xì)胞后會影響下游試驗(yàn)結(jié)果。
為什么要重視細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染?
1、污染率高:在細(xì)胞研究領(lǐng)域,支原體是臭名昭著的污染源,二十世紀(jì)九十年代的支原體污染率是四分之一,而目前有仍然有超過十分之一的基因表達(dá)研究(許多曾發(fā)表在頂尖雜志上),表現(xiàn)出支原體污染的跡象;
2、影響日趨嚴(yán)重:雖然支原體污染并不一定意味著研究結(jié)果無效,但它會影響數(shù)百個基因的表達(dá),并與細(xì)胞競爭營養(yǎng)阻礙細(xì)胞的生長。在目前測試的一組受污染的數(shù)據(jù)中(淋巴瘤細(xì)胞),已經(jīng)鑒定出 61 個被支原體改變的基因,干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這無疑是對時間,資源,經(jīng)費(fèi)很大的浪費(fèi);
3、難察覺:支原體污染*難以察覺的,污染后的細(xì)胞生長速率一般并未發(fā)生顯著的影響,無法用肉眼識別,除非采用專門的支原體檢測方法檢測;
4、污染源多:“草率操作"、細(xì)胞系流通的交叉污染、操作人員自身都是很重要的污染源;
5、難去除:支原體體積小,無細(xì)胞壁,約有 1%的支原體可通過過濾器,且一般抗生素根本無法有效抑制或者去除支原體,另外,部分抗生素使用后會對細(xì)胞產(chǎn)生敏感效果,從而影響細(xì)胞的狀態(tài);
6、重視程度日益增加:學(xué)術(shù)雜志發(fā)表實(shí)驗(yàn)結(jié)果需驗(yàn)證支原體污染影響,在國際上,支原體污染檢測已經(jīng)日益成為細(xì)胞培養(yǎng)污染常規(guī)檢測之一,同時也是有效規(guī)避支原體污染的重要方法之一。
世界性難題!!!!Nature 収布癿文獻(xiàn)表明細(xì)胞研究領(lǐng)域中存在嚴(yán)重的支原體污染問題
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
如何保護(hù)細(xì)胞細(xì)胞不受支原體的污染?
西美杰代理的德國PanReac Applichem 所提供Myco 系列支原體清除產(chǎn)品可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效地清除支原體污染,而且沒有細(xì)胞毒性。另有支原體檢測與預(yù)防系列產(chǎn)品可以給細(xì)胞提供更多的安全保護(hù)。
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測方案
一、AppliChem 支原體清除系列
對于普通細(xì)胞系,遭受污染以后可以通過重新復(fù)蘇,購買等途徑更換樣本,但是對于一些較難獲得的珍貴樣本,如干細(xì)胞,原代細(xì)胞,經(jīng)過特殊處理的,或訂購困難的細(xì)胞,一旦遭受支原體污染后,一定要馬上進(jìn)行處理。AppliChem研發(fā)的支原體清除的 Myco 系列產(chǎn)品,可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性,從而有效的清除支原體污染,并可以針對不同程度,不同細(xì)胞樣本進(jìn)行針對性處理,處理過程簡單,對細(xì)胞不會造成任何副作用。
名稱 | 主要成分 | 適用樣本 | 使用斱法 |
Myco-3 (貨號 A5240) | 環(huán)丙沙星 | 貼壁細(xì)胞,可清除大多數(shù)支原體污染 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,每 2-3 天換液,連續(xù)處理14天 |
Myco-1 (貨號 A5222) | 泰妙菌素 | 貼壁細(xì)胞,配合能解決頑固型支原體或者使用 Myco-3 處理停用后又出現(xiàn)支原體污染的情況 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基,與 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 處理 4 天后換 Myco-2 處理 3 天,如此重復(fù) 2-3 次即可 |
Myco-2 (貨號 A5233) | 二甲胺四環(huán)素 |
二、AppliChem 細(xì)胞污染預(yù)防系列
有效保護(hù)細(xì)胞的最好方式是對于細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的預(yù)防,如工作環(huán)境定期消毒處理,嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作,保證器皿無菌等各方面。在實(shí)驗(yàn)室中,CO2 培養(yǎng)箱,CO2 培養(yǎng)箱水盤,水浴鍋是非常重要的污染源。AppliChem 研發(fā)有系列污染預(yù)防系列產(chǎn)品專門針對這 3 大污染源,可有效預(yù)防真菌(及芽孢)、細(xì)菌、病毒等污染。使用方便,無腐蝕性,安全高效。
名稱 | 適用環(huán)境 | 預(yù)防微生物 | 使用斱法 |
Incubator-Clean (貨號 A5230) | CO2 培養(yǎng)箱, 工作等臺等 | 支原體,真菌及芽孢、細(xì)菌、病毒(包拪 HIV,HBV 等) | 即用型,噴霧處理*濕潤即可,無需轉(zhuǎn)移出細(xì)胞,建議每 2 周處理一次 |
Incuwater-Clean (貨號 A5219) | C02 培養(yǎng)箱水盤 | 支原體,真菌及芽孢、細(xì)菌、病 毒(包拪 HIV,HBV 等) | 100 倍稀釋加入水盤滅菌水中,建議每 2-4 周更換滅菌水 |
Aquabator-Clean (貨號 A9390) | 水浴鍋 | 細(xì)菌,真菌 | 100 倍稀釋加入水浴鍋,建議每 1-2 周吐水浴鍋加入一次,每 4-6 周給水浴鍋更換一次水 |
三、Applichem 支原體檢測系列
傳統(tǒng)的支原體檢測方法包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測、DNA 熒光染色檢測以及 PCR 檢測,除 PCR 檢測方法以外,其他檢測方法大多耗時長,要求檢測人員具有豐富的經(jīng)驗(yàn),并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性,對于一些稀有的支原體亞種無法有效檢測。
AppliChem 設(shè)計(jì)的支原體檢測試劑盒系列產(chǎn)品均是基于 PCR 方法,根據(jù)支原體 16S rRNA 保守序列設(shè)計(jì)引物,經(jīng)過 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增其 16S rRNA 片段,后采用瓊脂糖電泳方法檢測 270bp 條帶。相對傳統(tǒng)方法而言,具有強(qiáng)大優(yōu)勢:
高靈敏度:敏感度高達(dá) 100~1000CFU/ml,僅需 要 0.5 - 1.0 ml 細(xì)胞上清樣本即可檢測;
檢測品種廣泛:可檢測常規(guī)品種,同時對于稀有 亞 種 也 能 同 效 檢 測 , 如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis,幾乎覆蓋自然界 80 余個品種;
快速:操作時間只需 30 分鐘,全程 5 個小時內(nèi) 即可得到檢測結(jié)果;
可靠:試劑盒中包括有陽性對照 DNA,可保證 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性,減小因操作帶來的誤差;
安全性:無支原體培養(yǎng)過程,有效避免污染擴(kuò)大。
產(chǎn)品型號 | 檢測方法 | 適用儀器 | 試劑盒組分 |
PCR Mycoplasma Test Kit (貨號 A3744) | 普通 PCR-電泳檢測 | 普通 PCR 儀器 | Reaction Mix Buffer Solution Positive Template Control |
qPCR Mycoplasma Test Kit (貨號 A9019) | 熒光定量 PCR | LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®. | Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE) Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE) |
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測方案
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