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如何才能選到適合你的共聚焦顯微鏡?

時間:2021-9-28 閱讀:915
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  共聚焦顯微鏡比寬場顯微鏡具有更多的優(yōu)勢,共聚焦顯微鏡可以對樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號干擾,為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來越多,要如何進行選擇呢?
 
  共聚焦顯微鏡比寬場顯微鏡具有更多的優(yōu)勢,共聚焦顯微鏡可以對樣品做連續(xù)光學(xué)切片并排除非焦平面的信號干擾,為此共聚焦顯微鏡的應(yīng)用也的確更為普遍。不過市面上各種各樣的共聚焦顯微鏡越來越多,要如何進行選擇呢?在選擇共聚焦顯微鏡時,zui基本也zui重要的考慮因素主要有兩點:您想要研究的樣本類型(如:固定的細胞還是活細胞),以及您想要進行的檢測類型(如:靜態(tài)還是動態(tài)細胞過程)。
 
  固定細胞的共聚焦成像
 
  要對固定且染色了的細胞或組織成像,我們一般選擇激光掃描共聚焦(LSCM)。這主要是因為固定的死細胞缺乏活細胞中的快速生物學(xué)事件,能更好的受益于LSCM較高的空間分辨率。LSCM成像是通過激光對樣品進行光學(xué)層切,掃描速度(取決于掃描陣鏡速度)一般為1fps。曝光時間越長意味著光漂白的風(fēng)險越大,但對于固定的死細胞,時間并不是很關(guān)鍵,我們可以通過拍多張圖片來平均。
 
  活細胞的共聚焦成像
 
  成像活細胞需要額外的保護,以免不友好環(huán)境的干擾。在成像時,我們首先需要考慮的是保持細胞的活性和健康,恒溫加熱元件和灌流系統(tǒng)是的,尤其對于進行time-lapse(時間序列)的研究來說。控制活細胞生理狀態(tài)的快速生化事件是大多數(shù)人zui想要研究的,但這些事件對于傳統(tǒng)LSCM來說太快了。此外,LSCM的長時間曝光還會引發(fā)毒性光照損傷細胞。因此,對活細胞進行成像會需要特殊的共聚焦顯微鏡。
 
  對活細胞進行共聚焦成像一般有兩個選擇:快速掃描的激光掃描共聚焦和轉(zhuǎn)盤共聚焦??焖賿呙韫簿劢癸@微鏡用較快的共振掃描陣鏡(resonantscanningmirrors)取代較慢的galvanometersmirrors,能使掃描速度達到30fps;而轉(zhuǎn)盤共聚焦(SDCMs)的優(yōu)勢在于掃描速度更快(雖然不可避免的要損失空間分辨率),其速度理論上可達到2000fps(實際上往往受到其他因素的限制)。
 
  如果您擔(dān)心光漂白或者很弱的熒光信號,那么SDCM可能更加適合。SDCM采用兩個帶有陣列微孔的轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動來分散激發(fā)光,不同于LSCM對樣品進行點掃描,SDCM一次采集多個點(大約100個像素點),因而速度大大增加,并且SDCM的光漂白及光毒性更小。不過,您也可以采用快速掃描共聚焦來提高掃描速度,配合高靈敏檢測器,降低激發(fā)光能量來減少光毒性,這樣能夠保證傳統(tǒng)共聚焦的豐富功能。
 

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