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能夠把這些復(fù)雜的評(píng)估分析法由繁化簡(jiǎn)，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSK
能夠把這些復(fù)雜的評(píng)估分析法由繁化簡(jiǎn)，并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。
使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體，無(wú)需對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行前處理。抗體主要可以分離出3個(gè)洗脫峰。已有研究表明，抗體糖鏈末端的半乳糖數(shù)量越多，在此色譜柱中的保留能力越強(qiáng)，而保留能力越強(qiáng)的洗脫峰，其ADCC活性就越高。
細(xì)胞培養(yǎng)液中單克隆抗體的分離
TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測(cè)定和監(jiān)控細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養(yǎng)天數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)液，使用Protein A填料對(duì)抗體樣品粗純后，再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結(jié)果如下圖所示。
抗體細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)和產(chǎn)生抗體的變化
隨著培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)，抗體的3個(gè)洗脫峰會(huì)向前側(cè)的洗脫峰位移。雖然延長(zhǎng)了細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)，抗體的產(chǎn)量增加，但是由于受到細(xì)胞外糖鏈修飾酶的影響，在色譜柱中的保留能力較高的抗體（多糖的末端半乳糖數(shù)量較多的抗體）的洗脫峰反而減少了。因此，可以推定產(chǎn)生的抗體的ADCC活性已經(jīng)降低。
TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途
①確認(rèn)不同細(xì)胞株(CHO細(xì)胞、HEK細(xì)胞等)中抗體的性狀變化。
②確認(rèn)多個(gè)細(xì)胞株篩選時(shí)抗體的性狀變化。
③確認(rèn)當(dāng)改變細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑時(shí)抗體的性狀變化
④細(xì)胞培養(yǎng)過程中隨培養(yǎng)天數(shù)的變化導(dǎo)致抗體性狀變化的確認(rèn)。
⑤細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模放大(更改培養(yǎng)方法)時(shí)，確認(rèn)抗體是否發(fā)生性狀變化。
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