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在正常情況下，各種藥物以一定的比率與血漿蛋白結(jié)合，在血漿中常同時(shí)存在結(jié)合型與游離型，而只有游離型藥物才具有藥物活性。血漿蛋白結(jié)合率（plasma protein binding, PPB）實(shí)驗(yàn)的主要目的即是測(cè)定藥物與血漿蛋白的結(jié)合程度，即藥物進(jìn)入血液后，與血漿蛋白結(jié)合的藥量占血液藥物總量的比率‌。血漿蛋白結(jié)合率反映了藥物在體內(nèi)的分布情況，對(duì)于評(píng)估藥物的療效和副作用具有重要意義‌。

血漿蛋白結(jié)合率試驗(yàn)

目前常見的測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率的方法有平衡透析法（Equilibrium dialysis, ED）、超濾法（Ultrafiltration, UF）及超速離心法（Ultracentrifugation, UC）等。

【平衡透析法】

原理：ED采用半透膜分割的兩隔室裝置進(jìn)行測(cè)定，一側(cè)加入含藥的蛋白溶液，另一側(cè)加入空白的緩沖液，此條件下僅游離藥物可以自由穿過半滲透膜，孵育一段時(shí)間，兩側(cè)達(dá)到平衡后兩側(cè)的游離藥物濃度相等，結(jié)合態(tài)的藥物仍然停留于蛋白溶液側(cè)，通過測(cè)定兩側(cè)的藥物濃度即可算得PPB。

優(yōu)點(diǎn)：無需施加壓力；

         具有高通量潛力；

         操作容易；

         溫度和pH值可控；

         樣品量低。

缺點(diǎn)：需要大量等離子體和較長(zhǎng)的平衡時(shí)間；

         不適合不穩(wěn)定的化合物；

         不能用于高度疏水化合物。

【超濾法】

原理：UF采用半透膜分隔的兩隔室裝置進(jìn)行測(cè)定。含藥蛋白溶液加入上層隔室，在外界壓力或者離心條件快速的使游離藥物運(yùn)動(dòng)至下方buffer側(cè)，通過測(cè)定兩側(cè)化合物濃度計(jì)算PPB。

優(yōu)點(diǎn)：試驗(yàn)時(shí)間短，可顯著減少酯酶代謝、蛋白稀釋和蛋白滲漏造成的試驗(yàn)偏差。

缺點(diǎn)：藥物非特異性結(jié)合效應(yīng)較明顯，尤其對(duì)于高脂溶性化合物。

【超速離心法】

原理：UC利用非常高的離心力（625000g）來分離游離態(tài)和結(jié)合態(tài)藥物。離心之后結(jié)合態(tài)的藥物與血漿蛋白一起分布于底層，中間層即為游離藥物分布層，最上層為極低密度的脂蛋白和乳糜微粒漂浮物。通過測(cè)定中間層和離心前初始藥物濃度即可算得PPB。

優(yōu)點(diǎn)：具有時(shí)間短、樣品需求量小、非特異性吸附效應(yīng)弱和消除膜相關(guān)問題的優(yōu)勢(shì)。

缺點(diǎn)：成本相對(duì)較高，在超速離心的作用下可能改變化合物的結(jié)合平衡。

其中，由原理可知，平衡透析法（ED）是一種濃度驅(qū)動(dòng)的過程，通過具有不同分子量截?cái)帱c(diǎn)（MWCO）的選擇性和可滲透性膜孔（如8K或12K MWCO）的擴(kuò)散將小體積血漿中的游離蛋白結(jié)合藥物分離出來。由于沒有施加外力（如壓力），ED被認(rèn)為是研究蛋白質(zhì)相互作用的真實(shí)性黃金標(biāo)準(zhǔn)。

IPHASE遵循黃金標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)、開發(fā)由不銹鋼手柄、不銹鋼壓板、特氟龍版、不銹鋼連桿及底座組成的傳統(tǒng)平衡透析裝置。該裝置利用濃度驅(qū)動(dòng)的方法，輔以3.5Kd，12-14Kd，25Kd或50Kd的平衡透析膜（依據(jù)藥物分子量選擇），于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育16小時(shí)，助力客戶PPB試驗(yàn)驗(yàn)證。該裝置更適合一些試驗(yàn)體量大，且成本控制要求高的客戶。但傳統(tǒng)的平衡透析法也有需要大量等離子體和較長(zhǎng)的平衡時(shí)間等缺點(diǎn)，此時(shí)，快速平衡透析裝置就更為適用。

IPHASE快速平衡透析裝置

IPHASE/匯智和源作為體外研究生物試劑引·領(lǐng)者，基于平衡透析法（ED）存在的問題，升級(jí)、開發(fā)出一種快速平衡透析裝置，解決傳統(tǒng)ED技術(shù)需要大量等離子體和較長(zhǎng)的平衡時(shí)間的問題。

IPHASE快速平衡透析裝置，由含透析池、含透析膜的插件及底板組成，透析池內(nèi)通過插件和透析膜圍合形成一個(gè)獨(dú)立的透析膜室，而所屬透析池內(nèi)且處于透析膜室的外圍部分為緩沖液室，如下圖所示：紅色部分極為含透析膜的插件，其內(nèi)添加含藥的血漿等待測(cè)試驗(yàn)，白色孔則為PBS添加孔。

IPHASE快速平衡透析裝置的創(chuàng)造結(jié)合了平衡透析（ED）技術(shù)，該裝置也是由濃度驅(qū)動(dòng)，通過具有不同分子量截?cái)帱c(diǎn)（MWCO）的選擇性和可滲透膜孔的擴(kuò)散將小體積血漿中的游離蛋白結(jié)合藥物分離出來。它較普通的平衡透析裝置具有易于使用、高表面體積比、高通量、靈活性、確定性、可重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度等多重優(yōu)點(diǎn)，是PPB試驗(yàn)的又一大利器！

為驗(yàn)證裝置的實(shí)用性，IPHASE技術(shù)人員以SD大鼠血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)為例，使用華法林為陽(yáng)性藥物，在37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中振蕩孵育6小時(shí)。其中，Rat-6h是試驗(yàn)組，結(jié)果顯示其血漿蛋白結(jié)合率高于99%，滿足試驗(yàn)血漿蛋白結(jié)合率≥98%的要求；Rat-6h-PBS是陰性對(duì)照組，結(jié)果顯示兩側(cè)陽(yáng)性對(duì)照物可以透過半透膜，兩側(cè)數(shù)據(jù)接近一致，進(jìn)一步驗(yàn)證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

由此說明，IPHASE/匯智和源快速平衡透析裝置研發(fā)成功。其操作方便、均一性好，無需客戶自行操作透析膜，且避免了普通透析裝置由于使用時(shí)間久導(dǎo)致彈簧松緊不合適造成的漏液現(xiàn)象，是大部分客戶的最·優(yōu)選擇！

IPHASE相關(guān)產(chǎn)品

鑒于此，IPHASE為滿足不同客戶的多種需求，就快速平衡透析裝置，成功設(shè)計(jì)、研發(fā)出一次性/重復(fù)性底板及兩種不同規(guī)格的插件，同時(shí)還有多種適用于兩款平衡透析裝置的輔助產(chǎn)品及其它相關(guān)產(chǎn)品，具體信息如下表所示：

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的高·端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

發(fā)    文    章    得    獎(jiǎng)    勵(lì)

凡使用本公司產(chǎn)品，在國(guó)內(nèi)及國(guó)際刊物上發(fā)表論文（論文發(fā)表日起一年內(nèi)），并注明產(chǎn)品屬于IPHASE BIOSCIENCES Co.,Ltd. / 匯智和源生物技術(shù)（蘇州）有限公司所有，即可申請(qǐng)獎(jiǎng)勵(lì)。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同，給予不同金額獎(jiǎng)品：

非SCI論文及IF≤5分，500元禮品；

5分＜IF≤8分 800元禮品；

8分＜IF≤10分 1000元禮品；

IF≥10分 2000元禮品；

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匯智和源，致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑，IPHASE為公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。

• 快速平衡透析裝置

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