青島盛瀚色譜技術有限公司
褐藻膠寡糖中的甘露糖醛酸單糖和古羅糖醛酸單糖含量的測定
檢測樣品:褐藻膠寡糖
檢測項目:甘露糖醛酸單糖 古羅糖醛酸單糖
方案概述:在醫(yī)藥、食品領域,褐藻膠寡糖可作為糖尿病、肥胖癥、直腸結腸癌、習慣性便秘患者的療效食品;在飼料領域,褐藻寡糖克服了以往所有抗生素、益生素、酶制劑等的不足,用量少、天然、無殘留且穩(wěn)定性強,并能提高動物機體的抗病能力,促進動物生長,增加動物營養(yǎng),是優(yōu)良的飼料添加劑。
褐藻膠寡糖具有多種生物學功能,有整腸和解毒、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫調節(jié)等作用。
在醫(yī)藥、食品領域,褐藻膠寡糖可作為糖尿病、肥胖癥、直腸結腸癌、習慣性便秘患者的療效食品;在飼料領域,褐藻寡糖克服了以往所有抗生素、益生素、酶制劑等的不足,用量少、天然、無殘留且穩(wěn)定性強,并能提高動物機體的抗病能力,促進動物生長,增加動物營養(yǎng),是優(yōu)良的飼料添加劑。
褐藻膠是由1,4-甘露糖醛酸 (M)和1,4-古羅糖醛酸(G)不規(guī)則鏈接起來的線性長鏈分子,采用不同的降解方法(酸降解法,酶降解法,氧化降解法)降解褐藻膠,可以得到聚合度20以下的系列褐藻膠寡糖,由β-D-聚甘露糖醛酸(M)和α-L-聚古羅糖醛酸(G)組成的線型低聚合物,有聚甘露糖醛酸(PM)、聚古羅糖醛酸(PG)和雜合褐藻寡糖(PMG)三種類型產品。
褐藻膠寡糖是一種淡黃褐色粉末,能溶于水,穩(wěn)定性強。本實驗中使用具有脈沖安培檢測器的高效陰離子交換色譜對褐藻膠寡糖中的甘露糖醛酸單糖和古羅糖醛酸單糖進行檢測。詳情如下:
儀器和設備
表1 實驗過程中所使用的儀器設備
試劑和材料
除非另有說明,所用試劑均為優(yōu)級純。
水:超純水(18.2MΩ•cm);
50%氫氧化鈉:色譜純;
無水乙酸鈉:優(yōu)級純。
古羅糖醛酸單糖(客戶提供):2mmol/L;
甘露糖醛酸單糖(客戶提供):2mmol/L。
樣品的制備
精密稱取褐藻膠G段寡糖0.1088g,用超純水溶解稀釋定容到100mL,經0.22 μm濾膜過濾,直接進樣分析。
精密稱取褐藻膠寡糖0.1049g,用超純水溶解稀釋定容到100mL,經0.22 μm濾膜過濾,直接進樣分析。
將古羅糖醛酸單糖標準品(客戶提供)稀釋20倍,直接進樣分析。
將甘露糖醛酸單糖標準品(客戶提供)稀釋20倍,直接進樣分析。
分析步驟
色譜條件
流動相:
溶劑A:超純水;
溶劑B:250mM氫氧化鈉;
溶劑C:250mM氫氧化鈉+500mM乙酸鈉水溶液。
表2 淋洗液梯度變化表
流 速:0.5mL/min;
柱 溫:30℃;
進樣量:25μL;
色譜柱:Dionex CarboPac PA20 Analytical色譜柱,150 mm×3mm,配Dionex CarboPac PA20 Guard保護柱30 mm×3 mm。
電化學檢測器參數
模式:脈沖安培;檢測頻率:2Hz;反應時長Ts=200ms;Flexcell金電極。
表3 檢測器波形設置
衰減200μA;濾波器0.050Hz
標準溶液色譜圖
0.1mmol/L古羅糖醛酸單糖標準品色譜圖
0.1mmol/L甘露糖醛酸單糖標準品色譜圖
空白色譜圖
空白試樣的色譜圖
樣品測定
褐藻膠G段寡糖色譜圖
褐藻膠寡糖色譜圖
結果與計算
表4 檢測結果(含量%)
備注:①ND表明未檢出或低于檢出限;②測定值已扣除空白值;③不同方法、不同實驗室間檢測結果會存在差異。
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