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生物制品內毒素去除策略——Etoxiclear™內毒素親和層析
內毒素作為生物藥安全檢項,是法規要求的必檢項,所有藥物生產對于內毒素的控制都非常嚴格(<5EU/kg體重),內毒素的去除成為生物藥工藝控制的一個重要環節。內毒素去除目前面臨的困境是比較耗時,同時去除過程也會導致產品的損失以及毒性物質的引入。所以內毒素的去除一直困擾很多企業,特別是在大腸桿菌大規模生產階段。
內毒素的去除方法主要有超速離心,離子交換和親和層析的方法,在大規模生產工藝中內毒素的去除主要采用后兩種方式,離子交換原理是結合帶負電荷的內毒素,對于質粒DNA或者酸性蛋白質的內毒素去除效果會不夠理想,所以目前工業界傾向于親和層析的方法去除內毒素。親和層析的好處在于能夠特異性結合內毒素,終產品的損失少(相對于離子交換),應用范圍較廣,包括質粒DNA和蛋白質,同時,也不會有毒性物質的引入。
本文將推薦一款來自英國Astrea Bioseparations的Etoxiclear™層析介質,它是一種高性能、非離子交換、合成的親和層析吸附劑,可經濟高效地去除內毒素,支持GMP生產,有凝膠和一次性預裝柱兩種形式產品,滿足不同的工藝需求。
親和層析是一種特殊的蛋白質純化方法,其利用生物分子之間的特異相互作用進行分離。EtoxiClear™親和層析針對內毒素具有高選擇性和高分辨率,可以更好的去除內毒素。親和層析的優點在于其高度特異性和高純度,適用于對純度要求很高的生物制品的生產。雖然過離子柱可以在一定程度上控制內毒素水平,但是個別項目仍然會有超標的可能。EtoxiClear™是市場上非常特別的一款去除內毒素的產品,相比于離子層析方法,EtoxiClear™優勢包括:
高特異性:專為去除內毒素而設計,可特異性去除內毒素
高載量:高內毒素動態結合載量(> 1,000,000 EU/ml);
經濟高效,支持放大;
pH兼容范圍廣:pH 4.0 - pH 8.0,
滿足GMP物料要求,法規注冊資料完善
低蛋白結合率:通常目的蛋白回收率>90%;
高度穩定、人工合成、無毒的親和配基;
有預裝柱和填料兩種產品形式,可滿足不同需求。
填料耐堿性強:0.5M-1M NaOH CIP
EtoxiClear™內毒素親和填料性能數據
可擴展性
EtoxiClear™已被證明能夠在實驗室規模(5mL柱)和工業規模(785mL)下有效去除純化的免疫球蛋白溶液中的內毒素。
上樣:含有相似起始內毒素濃度的IgG蛋白溶液(~5 mg/mL)
處理能力強
EtoxiClear™可提供填料和預裝柱兩種形式產品,以滿足不同的實驗需求。下表可用于估算處理不同規模樣品所需的柱尺寸。
規格:EvolveD™柱,5 min保留時間
針對常用緩沖液的內毒素清除數據
EtoxiClear™可用于各種緩沖液的內毒素去除。下表顯示了細胞培養應用中常用的各種緩沖液的內毒素清除效率,即使較低的起始內毒素濃度(~20EU/mL)也可以有較高的內毒素清除率。
* 等于或低于檢測限值
高內毒素清除率
EtoxiClear™具有很高的內毒素清除率,可從多種蛋白樣品中進行出色的蛋白質回收,如下表所示的人血清白蛋白(HSA)和免疫球蛋白(IgG)溶液(均為~9 mg/mL)。
HSA樣品內毒素清除率99.7%
IgG樣品內毒素清除率98.9%
低蛋白結合率
與離子交換吸附劑不同,EtoxiClear™顯示出極低的蛋白質結合性,不受蛋白質等電點范圍限制,蛋白質回收率高(通常高于90%),如下所示:
EtoxiClear™技術參數
生物制品內毒素去除策略——Etoxiclear™內毒素親和層析
產品訂購信息
貨號 | 品名 | 規格 |
3250-00010 | EtoxiClear (10 mL) | 10mL |
3250-00025 | EtoxiClear (25 mL) | 25mL |
3250-00100 | EtoxiClear (100 mL) | 100mL |
3250-00500 | EtoxiClear (500 mL) | 500mL |
3250-01000 | EtoxiClear (1 L) | 1L |
6646 | EtoxiClear™ 4 x 1 mL | 4x1mL |
6647 | EtoxiClear™ 4 x 5 mL | 4x5mL |
6746 | EtoxiClear® Column, 1 x 1 mL | 1 x 1 mL |
6747 | EtoxiClear® Column, 1 x 5 mL | 1 x 5 mL |
4251-00005 | EtoxiClear 5 mL Column | 5mL |
4251-00050 | EtoxiClear 50 mL Column | 50mL |
AS025100-PC3250-G | EtoxiClear 50 mL EvolveS | 50mL |
4520-PC3250 | EtoxiClear™, 200 µL | 200µL |
Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學,擁有超過30年層析介質研發和生產經驗,是層析介質產品與服務供應商。目前使用Astrea的產品已有超過21個生產工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發和生產基地,專注為生物大分子和CGT領域提供行業的層析介質和技術服務。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術,解決了傳統生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實現更快、更環保、更具成本效益的純化過程,符合當今生物治療創新的需求。西美杰是Astrea Bioseparations中國區代理,為用戶提供完善的技術支持與售后服務。