化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>CC96308 GV3101(pJlC SA-rep)感受態(tài)
CC96308 GV3101(pJlC SA-rep)感受態(tài)
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語(yǔ)純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) CC96308
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2024/11/1 10:42:38
- 訪問(wèn)次數(shù) 38
產(chǎn)品標(biāo)簽
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株為 C58 型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基因 Rif,為了
便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)
粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身
的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT
DNA)型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:Gent,賦予 GV3101 菌株慶大m素抗性;在 GV3101 菌株中轉(zhuǎn)入
help 質(zhì)粒:pJIC SA_Rep 即為 GV3101(pJIC SA_Rep)菌株,可幫助 pgR106,pgR107,pGreen,pGs2
系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素(Tet)抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土
豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 GV3101(pJIC SA_Rep)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,
pGs2 (卡那m素抗性)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥ 103 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
GV3101(pJIC SA_Rep)
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 ×100 μL
100 ×100 μL
定制
基因型:C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pJIC SA_Rep -TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 和 pJIC SA_Rep 質(zhì)粒外,無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥103 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,在手心融化成冰水混合物,置于冰水浴中;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,用手撥管底混勻,依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘(或干冰乙醇浴和-80℃冰凍)、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無(wú)抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基,于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí);
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天(當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí),28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同
時(shí)加入 50 μg/ml Kan,20 μg/ml Rif 時(shí),需 28 ℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72-90 h)。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl,過(guò)高的利f平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。
4.因?yàn)?nbsp;Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略),所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮添加相應(yīng)抗生素。