CC96307 AGL1感受態
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- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 CC96307
- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2024/10/31 11:35:55
- 訪問次數 49
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產品簡介
AGL1 菌株為 C58,RecA 型背景,核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif 和羧芐青m素抗
性基 因 Carb ,為了便于轉化操作 ,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT
DNA ,此質粒含有 vir 基因 ( vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,pTiBo542DT-DNA
質粒自身的 T-DNA 轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。
pTiBo542DT-DNA 型 Ti 質粒含有篩選標簽:Strep,賦予 AGL1 菌株鏈m素抗性,適用于水稻、擬
南芥、楊樹等植物的轉基因操作,經 pCAMBIA2301 質粒檢測轉化效率 ≥ 5×103 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
AGL1
化學感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:C58 RecA (Rif R/CarbR) Ti pTiBo542DT-DNA (StrepR) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pTiBo542DT-DNA 外,無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥5×103 cfu/μg pCAMBIA2301 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,用手撥管底混勻,依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘(或干冰乙醇浴和-80℃冰凍)、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養基,于 28℃振蕩培養 2~3 小時;
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28 ℃培養箱培養 2-3 天(當平板只含有 50 μg/ml Kan 時,28 ℃培養 48 h 即可;平板中同
時加入 50 μg/ml Kan,20 μg/ml Rif 時,需 28 ℃培養 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃
培養 72-90 h)。
注意事項
1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應高于 25 μg/μl,過高的利f平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率;
4.因為 Ti 質粒丟失的概率極低(可以忽略),所以一般培養農桿菌時不考慮添加相應抗生素。