CC96302 LBA4404感受態(tài)
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 CC96302
- 產地
- 廠商性質 經銷商
- 更新時間 2024/10/31 10:44:26
- 訪問次數 42
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產品簡介
LBA4404菌株為 Ach5型背景,核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif,為了便于轉化操作,此
菌株攜帶一無自身轉運功能的章魚堿型 Ti 質粒 pAL4404,此質粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入
植物基因組必需的元件,pAL4404 質粒自身的 T-DNA 轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體 T
DNA 順利轉移)。 pAL4404 型 Ti 質粒含有篩選標簽:Strep,賦予 LBA4404 菌株鏈m素抗性,適用于菸
草、番茄、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產的 LBA4404 化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,
pCAMBIA2301 質粒檢測轉化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
LBA4404
化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:Ach5 (RifR) Ti pAL4404 (StrepR) Octopine
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除章魚堿型 Ti 質粒 pAL4404 外,無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出,在手心融化成冰水混合物,置于冰水浴中;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中,用手撥管底混勻,依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘(或干冰乙醇浴和-80℃冰凍)、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基,于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時;
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天當平板只含有 50 μg /ml Kan 時,28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同時
加入 50 μg/ml Kan,20 μg/ml Rif 時,需 28℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72-90 h)。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應高于 25 μg/μl,利ff平濃度過高不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低(可以忽略),所以相關抗性基因可以不用添加。