化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>技術(shù)服務(wù)>細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)>細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)>CC96306 EHA101感受態(tài)
CC96306 EHA101感受態(tài)
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 CC96306
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2024/10/31 10:42:26
- 訪問次數(shù) 44
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產(chǎn)品簡介
EHA101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基因Rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,
此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有 vir 基
因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T
DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT
DNA) 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:Kan,賦予 EHA101 菌株和卡那m素抗性,適用于玉米、水稻、煙
草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 EHA101 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pK7WGF2
質(zhì)粒(壯觀m素抗性)檢測轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EHA101
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:C58 (RifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR) Nopaline
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,在手心融化成冰水混合物,置于冰水浴中;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞中,用手撥管底混勻,依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘(或干冰乙醇浴和-80℃冰凍)、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘;
3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基,于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí);
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時(shí),28 ℃培養(yǎng)48 h即可;
平板中同時(shí)加入雙元載體抗生素,20 μg/ml Rif 時(shí),需 28℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif
則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 h)。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl,利f平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略),所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。