EC96301 EHA105感受態(tài)(電轉)
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海語純生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 EC96301
- 產地
- 廠商性質 經(jīng)銷商
- 更新時間 2024/10/31 10:20:03
- 訪問次數(shù) 36
產品標簽
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產品簡介
EHA105菌株由 EHA101 菌株改造而來,為 C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利f平抗性基因 Rif,
為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),
此質粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質粒
自身的 T-DNA 轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。EHA105 菌株適用于水
稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司開發(fā)的 EHA105 電轉感受態(tài)特別適用于大質粒的轉化:經(jīng)
pCAMBIA2301 質粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
EHA105
電轉感受態(tài)細胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型:C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
除琥珀堿型 Ti 質粒 pEHA105 外,無外源質粒 DNA 殘留;
電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷;或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上,使乙醇充分揮發(fā),然后插入冰中預冷;
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 質粒 DNA(體積不大于 5μl),用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中,蓋上杯蓋;
3. 開啟電轉儀,設置參數(shù)(2500 V ,200 Ω,25μF),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成后快速插
入冰中,加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中,28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
(注:此電轉化參數(shù)為 Bio-rad 推薦,使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板
上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天(當平板只含有 50μg/ml Kan 時,28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可;平板中同
時加入 50μg/ml Kan,20μg/ml Rif 時,需 28 ℃培養(yǎng) 60 h;如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時,則需要
28 ℃培養(yǎng) 72~90 h)。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10;
3. 利f平濃度不應高于 25μg/μl,利f平濃度過高不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。
4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低(可以忽略),所以相關抗性基因可以不用添加。