產品概述

產品描述

BL21是最早開發的用于原核表達的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表達菌株均來源于BL21菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7啟動子驅動的蛋白表達(如：pET系列)；但含有大腸桿菌RNA聚合酶，適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統的表達(如：pGEX，pMAL質粒)。其中ompT可減少外膜蛋白酶的表達量，從而減少重組蛋白的水解，提高表達產量；hsd基因變異可致菌株細胞內的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，從而提高PCR產物的轉化效率。BL21感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達107 cfu/μg DNA。

產品優勢

? 高轉化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
? 適合依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統的表達

產品組分

基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)

產品應用

BL21感受態細胞適用于依賴于大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統的表達(如：pGEX，pMAL質粒)。

實驗流程

1. 解凍感受態細胞：從-80 ℃取感受態細胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，約5-10 min，放置時間過長會影響轉化效率。

2. DNA樣品的轉化：每100 μL感受態加入待轉化DNA樣品(例如質粒、連接產物或重組產物等)約10 μL，然后輕輕彈擊管底約2-3次，立即冰上靜置孵育30 min。

? 加入待轉化DNA樣品體積通常不宜超過感受態細胞體積的10%。
? 加入待轉化DNA樣品后應輕柔操作，避免使用移液槍吹打混勻。
? 如果用于質粒的轉化擴增，冰浴靜置約10 min后可以直接涂板并培養過夜；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴格執行后續的熱激處理和復蘇培養等步驟，以提高轉化效率。

3. 熱激處理：將冰浴后的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激90 s。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2-3 min以快速冷卻。

? 熱激及轉移至冰浴過程中請勿晃動離心管。

4. 復蘇培養：加入900 μL 37℃預熱的LB或SOC培養基，顛倒數次混勻，37℃搖床約220 rpm復蘇培養45 min。

5. 收菌涂板：如果用于質粒的轉化擴增，建議直接取50-100 μL進行涂板即可；如果用于連接產物或重組產物的轉化，建議先5000 g，1 min室溫離心沉淀細菌，吸除約900-950 μL上清，然后用剩余的約50-100 μL菌液重懸，涂布到含相應抗生素的LB平板上。

6. 過夜培養：將平板倒置放于37℃培養箱培養過夜。

? 培養前需要將平板在超凈臺中稍微晾至無明顯水漬，有利于形成單克隆。

保存條件

-80℃保存；請勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

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