10923ES 通用型一步法無縫克隆試劑盒(用于同源重組)
| 參考價 | ￥655.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號10923ES
- 所在地上海市
- 廠商性質生產廠家
- 更新時間2024/10/7 13:44:00
- 訪問次數 166
| 20T | 655.00元 | 99 件可售 |
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企業簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質改造和酶進化技術為驅動，聚焦生命科學產業鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發、生產與銷售的高新技術企業，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發路徑，成為國內少數同時覆蓋三大品類生物試劑、兼備核心技術自主研發能力和規模化生產能力的高新技術企業，產品廣泛應用于生命科學研究領域、診斷與檢測領域和生物醫藥領域。
主營業務
公司憑借在蛋白質改造和酶進化領域的技術優勢和深耕生物試劑行業多年積累的豐富經驗，構建了品質優良、類型齊全、種類豐富的產品管線。自公司成立以來，公司研發、生產和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養系列、細胞轉染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫藥等領域。
發展歷程
榮譽資質
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權的方式保障核心技術和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設。截至2022年3月31日，公司已經獲得授權18項（其中發明14項、實用新型1項、外觀設計3項）和45項與生物試劑相關的軟件著作權，擁有經國家知識產權局商標局核準的注冊商標權37項以及4項境外注冊商標，是國家高新技術企業和上海市專精特新企業。
創新平臺
經過多年的產品研發技術經驗的沉淀以及持續的研發創新，翌圣生物積極開展“產學研”合作，與擁有生物催化與酶領域國家重點實驗室的湖北大學、擁有教育部工業生物領域重點研究基地的江南大學展開合作，優化生物試劑關鍵原料的生產和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術、生物信息技術、細胞生物學技術、免疫學技術、生化分析技術等生命科學領域的共性生物技術為基礎，建立了六大核心技術平臺——雙向分子酶理性設計與定向進化平臺、密度發酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關鍵原料研發平臺、高通量測序建庫試劑創新研發平臺、高性能單克隆抗體研發平臺和mRNA醫藥應用研發平臺，目前已經自主研發出20項核心技術，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發路徑，覆蓋技術研發、產品升級、規模生產和質量控制等生物試劑研發和生產的各關鍵環節。
工業化生產
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設運營的工業化生產基地，配有噸級發酵線、工業級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質量管理體系認證，從原料控制、生產管理、質檢管控、倉儲運輸等對生產線進行360度管理監督，保證產品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產品。
客戶服務
翌圣生物憑借優質穩定的產品質量、高效及時的響應能力、快速穩定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究、體外診斷、基因測序、生物醫藥等的生物試劑。與中國科學院、清華大學、北京大學、復旦大學、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業客戶建立了穩定、緊密的合作關系，公司產品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發表中。
公司企業文化
幫助客戶創造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領域全球Top⑩
◎ 具備驅動產業變革的技術創新能力
◎ 擁有一支持續學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術創新和產品升級，不斷拓展核心技術的應用領域，為客戶提供更為的產品與服務，助力我國打造自主可控的生物試劑產業鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰略，繼續布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產業發展貢獻力量。
分子生物學試劑，細胞生物學試劑，免疫學試劑，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit是新一代的同源重組克隆試劑盒，精心優化的第二代2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix預混了重組酶和重組反應所需緩沖液，并添加了的重組增強因子，用于同源重組可顯著提高重組克隆效率。
該試劑盒可以將PCR產物定向克隆至任何載體的任何位點，兼容未純化PCR產物、直接回收的PCR產物、低濃度的膠回收產物，本產品可重組同源臂GC含量30%-70%的接頭片段。將載體線性化，并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的線性化載體末端同源序列，使得插入片段PCR產物5’和3’末端分別帶有與線性化載體兩末端對應的一致的序列。PCR產物和線性化載體在重組酶的作用下，在50℃條件下最快僅需5 min即可完成重組反應。克隆陽性率可達95%以上。
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 10923ES05 | 10923ES20 | 10923ES50 |
10923-A | 2 × Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
10923-B | 500 bp control insert (25 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
10923-C | pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。
簡版使用說明
1.重組反應
1)線性化載體和插入片段使用量
Hieff Clone®重組反應體系各個片段及載體插入總濃度為0.02 - 1 pmol。載體與各個插入片段摩爾比為1:2*。對應的DNA質量可由以下公式計算獲得：
pmol = (插入片段使用量ng) × 1,000 / (插入堿基對數 × 650 daltons)
50 ng 5,000 bp的DNA片段約為0.015 pmol
50 ng 500 bp的DNA片段約為0.15 pmol
*當插入片段長度大于載體時，最適載體與插入片段使用量的計算方式應互換，即插入片段當做載體，載體當做插入片段進行計算。線性化載體及插入片段的反應終濃度可達到1 ng/μL。線性化載體和插入片段擴增產物未純化直接使用時，使用總體積應不超過反應體系體積的1/5，如20 μL體系不超過4 μL。
簡便的投入量計算公式：插入片段投入量=2×插入片段長度×插入載體投入質量/載體長度
2)重組反應體系（可等比擴大或縮減反應體系，冰上配制，各組分使用前需混勻）
組分 | 重組反應體系 |
2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix | 10 μL |
每個插入片段投入量 | X |
目的載體投入量 | Y |
ddH2O | To 20 μL |
表1 反應體系
3)重組反應條件
體系配制完成后，用移液器輕輕吸打混勻各組分，短暫離心將反應液收集至管底。
當插入1個片段時，反應條件為50℃，5 min；當插入片段數為2-6個時，建議反應條件為50℃，10 -50 min（反應時間隨片段數增多而延長，如表2所示）。超長載體片段連接，建議反應時間為40-60 min。
連接片段數 | 重組反應時間 |
2 | 10 min |
3 | 20 min |
4 | 30 min |
5 | 40 min |
6 | 50 min |
表2 反應時間
反應產物可直接進行轉化，也可儲存于-20℃，待需要時解凍轉化。
轉化
提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。
在冰上解凍快速克隆感受態細胞（如：DH5α Fast Chemically Competent Cell，Cat#11803ES）。
取10 μL冷卻重組產物，加入到100 μL感受態細胞中，輕彈管壁數下混勻，在冰上放置5 min。
用200 μL移液槍將上一步的混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上，均勻涂布。
將平板置于37℃培養箱倒置過夜培養。若進行藍白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養15 h。
克隆鑒定
快捷的方法是菌落PCR。用無菌的槍頭或牙簽將單個菌落挑至菌落PCR Mix中混勻（如：2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)，Cat#10157ES），加入引物直接進行PCR反應。推薦至少使用一條通用測序引物進行菌落PCR，可以避免PCR假陽性的產生。后續也可用于酶切或測序鑒定。
注意事項
1.需自備的材料：
1)自備樣品：自備好線性化載體和插入片段。
2)自備試劑（僅羅列部分）：
超級感受態：轉化效率＞108 cfu/μg，如翌圣DH5α快速化學感受態細胞（Cat#11803ES）。
高保真酶：2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)（Cat#10164ES）或其他等效產品。
菌落PCR mix：2× Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix (with Dye)（Cat#10157ES）或其他等效產品。
核酸染料：YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water)（Cat#10202ES）或其他等效產品。
3）自備儀器耗材（僅羅列部分）：PCR儀，水平電泳槽，切膠儀，EP管等。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 本產品僅作科研用途！
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