普施安紅-瓊脂糖
- 公司名稱 南京億迅生物科技有限公司
- 品牌 億迅生物
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 江蘇 南京
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2024/9/11 11:35:25
- 訪問次數(shù) 143
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
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1、 產(chǎn)品介紹
Red NUPharoseFF是活性紅120（又稱普施安紅HE-3B）活性染料鍵合在NUPharose瓊脂糖微球上得到的親和填料。活性紅120是多環(huán)染料，與NADP+具有結(jié)構(gòu)類似性，可用于純化核苷酸依賴性酶、脂蛋白、乳酸脫氫酶、纖溶酶原、肽、激素等的純化。除了作為親和填料使用，本產(chǎn)品配基含芳香環(huán)和陰離子，也通過靜電作用或者疏水相互作用進(jìn)行非親和純化。
2、 產(chǎn)品特點(diǎn)與技術(shù)指標(biāo)
品名 | 普施安紅-瓊脂糖 |
基質(zhì) | 6%交聯(lián)瓊脂糖 |
配基 | 活性紅 120 ，~2 μmol/mL |
粒徑范圍 a | 45~165 μm |
平均粒徑 | ~90 μm |
動(dòng)態(tài)結(jié)合載量 b | ~15 mg BSA/mL |
推薦工作流速 | 60~300 cm/h |
最大流速與壓力 c | >1500 cm/h ，0.5 MPa |
使用 pH | 4~8.5（推薦的工作 pH），3~12（長(zhǎng)期穩(wěn)定）；2~14（短期穩(wěn)定） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、0.5 mol/L 氫氧化鈉、8 mol/L 尿素、 6 mol/L 鹽酸胍、70%乙醇。 |
儲(chǔ)存與運(yùn)輸 | 20%乙醇，2~30 ℃ |
3、 使用方法參考
3.1 色譜柱裝填
以下闡述與層析系統(tǒng)連接時(shí)，填料的色譜柱裝填方法。
（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。
（2）填料用量計(jì)算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降讀取的穩(wěn)定體積。Red NUPharose FF的壓縮比為1.15。為使達(dá)到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。
（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù)3次，以除去保存液。
（4）裝柱填料懸液準(zhǔn)備：將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦校尤脒m量的裝柱液，制成 50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。
（5）裝填前準(zhǔn)備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的裝柱液，擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。
（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時(shí)使用裝柱器），為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。
（7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)記界面穩(wěn)定時(shí)的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關(guān)閉柱底的閥門/堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置下方與壓縮比對(duì)應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。
3.2 柱效測(cè)定和評(píng)價(jià)
完成裝柱后、使用前可通過柱效測(cè)定和評(píng)價(jià)可以確認(rèn)層析柱裝填質(zhì)量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對(duì)稱因子（As）來評(píng)價(jià)。
3.3 平衡與上樣（Equilibration & Loading）
在上樣前，需用緩沖液A在操作流速下平衡層析柱，該過程通常需要5~10個(gè)柱體積的緩沖液A，以電導(dǎo)、pH等檢測(cè)信號(hào)參數(shù)不變且與緩沖液A對(duì)應(yīng)為準(zhǔn)。可以選擇磷 酸鹽、Tris-HCl等常見的緩沖體系。
上樣量可按“mg目標(biāo)蛋白/mL填料”來設(shè)定，通常為DBC10%的50~80%，例如Red NUPharoseFF產(chǎn)品對(duì)的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量為~15mg/mL，純化時(shí)的上樣量可為7.5~12mg/mL。除了DBC10%，也可以測(cè)試上樣流穿液中的目標(biāo)蛋白確定上樣量。上樣前需要對(duì)樣品進(jìn)行離心（10000 g以上）、過濾（0.22或0.45μm）處理，以免堵塞色譜柱。
上樣后需要3~10個(gè)柱體積的緩沖液A 再平衡層析柱。
3.5 洗脫（Elution）
通常在緩沖液A中添加3 M NaCl或者2 M KCl可將目標(biāo)蛋白洗脫。
3.6 再生（Regeneration）
純化后可用弱酸和弱堿性緩沖液交替沖洗色譜柱3~4 次，進(jìn)行填料再生，例如0.1mol/L NaAc+0.5mol/L NaCl（pH4.5）和0.1mol/L Tris·HCl+0.5mol/L NaCl（pH8.5）。然后用平衡緩沖溶液平衡。
3.7 在位清洗（CIP）
通常上述的洗脫和再生過程可將填料清洗。若發(fā)生柱壓升高，或?yàn)榱吮苊饨徊嫖廴荆刹捎靡韵氯軇┻M(jìn)行在位清洗：0.1~0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或30%異丙醇等。在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。清洗后需用3~5 柱體積的純水除去上述溶劑。
3.8 填料保存
填料的初始保存液為20%乙醇，使用過后可繼續(xù)用20%乙醇并添加0.5M NaCl保存。保存溫度在2~30 ℃為宜，不可凍存。
普施安紅-瓊脂糖
南京億迅生物科技有限公司出品的各類干擾物質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)格實(shí)惠，在國(guó)內(nèi)各科研院所和高校擁有良好的品譽(yù)。
該類產(chǎn)品還有：3-氨基苯硼酸-瓊脂糖，硫酸酯-交聯(lián)纖維素，硫酸葡聚糖-瓊脂糖，大豆胰蛋百酶抑制劑-瓊脂糖，藍(lán)膠-瓊脂糖等。
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