任何的儀器校準都是為了使其工作更準確。紫外分光光度計是基于紫外—可見分光光度法原理，利用物質分子在紫外—可見光譜區的輻射吸收進行分析的分析儀器，其校準工作必須符合一定的規范要求。
1.儀器校準后，應打開紫外分光光度計，并加熱足夠的時間使其穩定，然后再進行，一般至少在進行后30分鐘。
2.選擇儀器校準標準物質時，要注意在標準值的重復性條件之下（即標準物質規則的操作條件之下）進行校準，否則會產生錯誤的校準結果。例如，使用GBW（E）130066分光光度計標準溶液進行校準時，必須滿足兩個條件：。
1.待儀器校準儀器的光譜帶寬應為2nm。如果儀器的光譜帶寬不能調節，且大于2nm，則標準溶液給出的值不適用，應使用校正值。
2.用于校準的兩個石英比色皿的內徑應為（10±0.2）mm，并在235nm、257nm、313nm和350nm處具有良好的匹配性，以便能夠重現標準值。
3.用標準溶液進行儀器校準時，還必須特別注意校準和測量時的實驗室溫度，因為這些標準物質在不同溫度下有不同的透光率標準值。
4.用于標準品的標準物質必須在說明書規定的條件之下貯存。如，干涉濾光片應保持在干燥、清潔的環境之中，防止表面被污染、受潮、膠合或發霉。所有標準物質應在證書之上注明的有效期之內使用。
5.紫外分光光度計選用的中性濾光片標準值的不確定度必須滿足傳遞標準。儀器校準時，要注意標準過濾器的方向性。