過氧化物酶（POD）測試盒

本品用于科研實驗,不用于臨床。

生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?

 生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。

生化試劑盒樣本檢測的一般要求:

1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。

2)樣本處理后盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。

求

3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。

4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。

微量法和分光光度法的區別?

分光光度法:主流測定體系為1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。

微量法:主流測定體系為0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。

試劑盒規格中是100管和50管是什么意思?

(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于

空白管或者對照管。值得特別注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為8個(假設做3次重復)

(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重復測定3次,那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用

于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特別注意的是,100

管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅為16個(假設做3次重復)。

如何防止試劑盒失效?

   不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒后,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正確,注意瓶中試劑狀態是否與說明書一致。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行確認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分別保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分別按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。

如何進行預測定?

(1)務必在7個工作日內進行預測定,以確定該試劑盒是否適合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。

(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀態,操作規范,控制好測定條件,尤其是溫度。

(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會確認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而確保您的測定結果可靠。

熒 光 分 析 法

       熒光分析法是指利用某些物質被紫外光照射后處于激發態，激發態分子經歷一個碰撞及發射的去激發過程所發生的能反映出該物質特性的熒光，可以進行定性或定量分析的方法。由于有些物質本身不發射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發射熒光的物質轉化成能發射熒光的物質。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發射熒光的物質生成絡合物，各種絡合物能發射熒光，再進行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發熒光的無機物質和有機物質進行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。

比色皿有哪些規格?

(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,只能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。

(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用標儀(需要自備酶標板)

(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。

(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一致的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其內

容積差異在于壁的厚度。

代測的優點

(1)更加省事兒,不必為測定犯難。用戶只要提供樣品和想測定的指標,就不再需要為測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間

的限制,就等著拿到數據寫論文。

(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了定制度。

(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因為缺乏測定經驗,導致測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是最珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量只有用戶自己才能控制和保證。

生化檢測試劑盒的基本原理

 生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中的是底物-酶法。

底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶復合物。隨著時間的推

移,底物-酶復合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未消化的底物。未消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝產物都會對復合物的穩定性產生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。

生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?

  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常只分樣本類型,不分種屬。但是某些指標在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系確認。

生化試劑盒樣本檢測的一般要求:

1)于生化檢測而言,樣本最-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需將血液洗凈擦干后再進行稱重處理。

2)樣本處理后最-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。

3)樣本需澄清,若不澄清,需離心后取上清進行檢測(特殊指標除外)。

4)樣本值應在試劑盒線性范圍內,若超過線性范圍,需稀釋后再進行檢測,若低于檢測范圍,需增加樣本濃度后進行檢測。

微 量 分 析 法  

      微量分析(Microanalysis)在化學分析中，其試樣重量為1-10mg的化學分析方法稱為微量分析。有微量定性分析和微量定量分析之分，定性常采用點滴反應和顯微結晶反應等靈敏度較高的分析方法，定量分析常用重量、容量及儀器等分析方法。在以試樣重量不同的分析分類中還有半微量分析和超微量分析等。

微 量 和 超 微 量 分 析

       微量、超微量分析和常量分析主要的差別是取樣的不同。一般稱樣在0.01克~0.001克者為微量分析，小于0.001克者為超微量分析。正因為樣品很少，所以在分析操作上也和常量分析很不相同。例如沉淀物的溶解度、指示劑的誤差等對常量分析的影響可以忽略，而在微量和超微量分析時就會引起很大的誤差。尤其是超微量分析要求更嚴格，須考慮到溶液本身在空氣中的蒸發，因此在進行滴定時必緩在潮濕的空氣中進行。

       一般微量分析用的器皿都很小，按其要求的不同有各種不同的形狀。各種儀器分析法經過適當的改進后，可以直接應用在微量分析上。

超微量分析由于樣品太少，因此必須在顯微鏡下進行所有的分析操作(如沉淀和濡定等)，某些儀器分析(如電位滴定，電解和電導等)，也可用來作為超微量分析之用。

       微量分析在研究工作中用得極廣。尤其是在進行稀有元素化學研究時，在解決地球化學同題，研究某些稀有元素礦物粗成及其分配規律時，往往只能得到極少的樣品，在這選種情況下一般的常量分析法是無法進行分析的，只有靠微量分析法來解決。另外，在生物化學中微量分析的應用更是普遍

過氧化物酶（POD）測試盒

本品用于科研實驗,不用于臨床。

測定意義:

輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生為 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理:

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原為 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。

需自備的儀器和用品:

酶標儀、臺式離心機、移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;

試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;

試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;

試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;

試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。

NAD+和 NADH 的提取:

1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:

NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:

NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:

NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心

10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。

充分混勻,靜置 5min 后,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉淀中加入:

混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔板中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。

注意事項:

1、如果一次性測定樣本數較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。

2、對照管和測定管的測定步驟的區別:對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應 20min 后再加試劑六。

3、反應過程中注意避光。

4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)將測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。

5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.

NAD+和 NADH 含量的計算:

(一) NAD+含量的計算

標準條件下的回歸曲線為 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 為△A,x 為 NAD+濃度 nmol/mL

1、血清(漿)中 NAD+含量計算

NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)

2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)

(二)NADH 含量的計算

標準條件下的回歸曲線為 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 為△A,x 為 NADH 濃度 nmol/mL

1、血清(漿)中 NADH 含量計算

NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)

2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)

V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。

注 意: 檢測限為 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot