產地類別 | 國產 |
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產品信息
生化試劑-CD4細胞分選磁珠 可用于對細胞進行磁性標記。標記后,將細胞懸液加載到分選柱上,該柱放置在含分選器的磁場中。 磁性標記的CD4+細胞被保留在柱內。未標記的細胞貫穿其中而被去除。將分選柱從磁場中移除之后,洗脫磁性標記的CD4+細胞作為陽性選擇的細胞。
· 高磁珠結合力
· 簡便、快捷
· 高純度、高得率、高活率
使用方法
試劑和儀器要求
1.緩沖液: (pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA,2-8C)。
2.分選柱和分選器
3.(可選)用于流式細胞術分析的熒光偶聯CD4抗體。
4.(可選)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式細胞術排除死亡細胞。
5.(可選)預分離過濾器用于去除細胞團塊。
操作步驟
一、樣本準備
當處理抗凝的外周血液時,應通過密度梯度離心法分離外周血單核細胞(PBMC)。
在處理組織時,用標準的制備方法制備單細胞懸浮液。
二、磁珠標記
1.細胞計數。
2.300g 離心10min,去除上清。
3.每 10?細胞,用80μL緩沖液重懸。
4.每 10?細胞,用20μLCD4磁珠混勻。
5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育,需要增加孵育時間;如果是常溫孵育,會增加非特異結合)。
6.(可選)加入染色抗體,在2-8℃避光孵育5分鐘。
7.每10?細胞,加入1-2mL緩沖液洗滌,300g離心10min,棄上清。
8.用 500μL 緩沖液重懸細胞。
三、磁性分選
1.將分選柱放置在分選器的磁場中。
2.將分選柱中加入適量緩沖液,充分濕潤分選柱(xM: 500μL;xL: 3 mL)
3.將細胞懸液加到分選柱中。
4.結合磁珠的細胞會被吸附到分選柱上,沒有結合的細胞會順著液體流下來。加適量的緩沖液,待液體全部流盡,再加入適量緩沖液,一共洗3次。收集總流出物。這是未標記的細胞。(xM: 3X500μL;xL: 3x3mL)
5.將分選柱從分選器中取出,并將其放在合適的收集管上。
6.加適量的緩沖液到分選柱中,迅速用塞子推下,得到就是目的細胞。(xM: 1mL;xL: 5 mL)
7.(可選)為了提高標記細胞的純度,洗脫部分可以在第二個xM或xL柱上富集。使用新的分選柱重復步驟1至6中描述的磁選過程。
保存方法
在2-8℃條件下避光保存,請勿冷凍。有效期見試劑外標簽。
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