人視網膜微血管內皮細胞采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法、最后通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，人視網膜微血管內皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞，它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節血壓、抗血栓形成等有重要作用，在視網膜血管疾病的發病機制中有重要病理生理學意義。由于從不同的組織和器官獲得的內皮細胞具有不同的特性，在腦和視網膜中，這些內皮細胞具有內屏障的功能，在調節血管生理狀態，釋放血管活性物質以及新生血管的形成中發揮著重要作用，體外分離培養RCEC對研究視網膜血管性疾病發生發展的病理生理機制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。視網膜血管的生成是由內皮細胞、外膜細胞、星形膠質細胞產生的各種正負調節因子產生平衡而成。大部分致盲性疾病如糖尿病視網膜病、早產兒視網膜等都與血管生成有關。人視網膜微血管內皮細胞病變的主要生理變化有視網膜炎癥、視網膜動脈硬化以及視網膜出血。

1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4.待細胞貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養基。

備注：由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。

1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3.傳代培養過程中，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。