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XSL0200 生物細(xì)胞培養(yǎng)遷移侵襲MTT轉(zhuǎn)染流式分選誘導(dǎo)
參考價(jià) | ¥ 1000 |
訂貨量 | ≥1個(gè) |
- 公司名稱 星森林(浙江)生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) XSL0200
- 產(chǎn)地 浙江
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2023/12/4 16:34:01
- 訪問次數(shù) 71
生物細(xì)胞培養(yǎng)遷移侵襲MTT轉(zhuǎn)染整體課題實(shí)驗(yàn)服務(wù)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)流式分選誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)外包
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技術(shù)服務(wù),技術(shù)咨詢,實(shí)驗(yàn)外包,動(dòng)物實(shí)驗(yàn),細(xì)胞實(shí)驗(yàn),流式檢測,病理檢測,SCI論文,生信分析,細(xì)胞因子等實(shí)驗(yàn)
生物細(xì)胞培養(yǎng)遷移侵襲MTT轉(zhuǎn)染流式分選誘導(dǎo)
一、服務(wù)介紹
細(xì)胞遷移是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。細(xì)胞遷移為細(xì)胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細(xì)胞體尾部收縮在時(shí)空上的交替過程。細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一,是機(jī)體正常生長發(fā)育的生理過程,也是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動(dòng)形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、 免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過程中都涉及細(xì)胞遷移。檢測細(xì)胞遷移能力的實(shí)驗(yàn)包括劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是簡捷測定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法,在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上, 用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中yang區(qū)域劃線,去除中yang部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間是一種簡單易行的檢測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方法,實(shí)驗(yàn)成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱為上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔,上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液。將細(xì)胞種在上室內(nèi),由于膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長、運(yùn)動(dòng)等的影響。
三、實(shí)驗(yàn)流程
劃痕實(shí)驗(yàn)
1. 用marker筆在6孔板背后均勻得劃橫線;
2. 在孔中加入細(xì)胞;
3. 第二天用槍頭垂至于背后的橫線劃痕;
4. 用PBS洗去處劃下的細(xì)胞,培養(yǎng)不同時(shí)間,取樣,拍照;
5. 數(shù)據(jù)處理:每個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞整體遷移距離=每個(gè)時(shí)間點(diǎn)距離長度-0時(shí)距離;
6. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
遷移實(shí)驗(yàn)(cell migration assay)
實(shí)驗(yàn)材料
(1)Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning)
(2)細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑:無血清培養(yǎng)基,10%血清培養(yǎng)基,PBS,0.02%EDTA
(3)固定液:甲醇
(4)染色液:Giemsa染液
(5)封片劑:中性樹膠
(6)其他:小鑷子,棉棒,載玻片,蓋玻片
細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) (cell invasion assay)
實(shí)驗(yàn)材料
(1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存
(2)其余材料同遷移實(shí)驗(yàn) 操作步驟
(3)Matrigel在4℃過夜融化;
(4)用4℃預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel至終濃度1mg/ml,冰上操作;
(5)在chamber上室底部zhong央垂直加入100μl稀釋后的Matrigel,37℃溫育4-5小時(shí)使其干成膠狀;
(6)后續(xù)步驟同遷移實(shí)驗(yàn)(1-8)。
注意事項(xiàng)
(1)Matrigel在過高或過低的溫度均易凝固,因此操作所需槍頭和離心管應(yīng)提前在4℃預(yù)冷; (2)鋪膠時(shí)保證液面水平,膠的厚度均勻一致,切勿產(chǎn)生氣泡;
(2)其他注意事項(xiàng)同遷移試驗(yàn)。
Transwell實(shí)驗(yàn)
1. 采用未鋪 Matrigel 膠的 Transwell 小室用于實(shí)驗(yàn);
2. 制備細(xì)胞懸液;
3. 接種細(xì)胞;
4. 檢測穿過的細(xì)胞數(shù);
5. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
注意事項(xiàng)
(1)根據(jù)待測細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的chamber。常用的為8.0-μm孔徑(如AGS細(xì)胞),如果細(xì)胞 體積較大可以考慮用10-μm孔徑;
(2)根據(jù)待測細(xì)胞的遷移能力強(qiáng)弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時(shí)間。常規(guī)24-well chamber接種細(xì)胞數(shù)約為 2≈5×104/well,遷移時(shí)間12≈36小時(shí);
(3)由于Corning公司的24-Transwell內(nèi)含12個(gè)獨(dú)立的chamber,為了避免操作污染,每次實(shí)驗(yàn)可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板(Corning);
(4)如果細(xì)胞遷移能力較弱,下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時(shí)獲得的上清加50μg/ml FN (Fibronectin),具體可查閱相關(guān)文獻(xiàn);
(5)細(xì)胞懸液加入膜zhong央,盡量保證液面水平;
(6)固定染色擦洗時(shí)動(dòng)作小心,避免擦去膜底面的細(xì)胞。但一定要充分擦凈膜表面上未遷移的細(xì)胞,以 免影響讀數(shù)。尤其是膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷子纏上濕棉花擦洗,但要小心避免將膜戳破;
(7)Chamber和膜上都無法標(biāo)記,操作時(shí)應(yīng)小心避免混淆實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組;
(8)充分晾干,避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。
四、服務(wù)說明
1. 客戶提供:細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞),所需藥品,藥物處理方式和濃度。
2. 公司提供:基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果、剩余藥品。
3. 實(shí)驗(yàn)周期:大約2-3周左右,具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
服務(wù)對(duì)象:
1、在職或?qū)B毰R床研究生、博士生
● 實(shí)驗(yàn)室條件的不完備
● 文章設(shè)計(jì)不完善
● 臨床工作繁忙
● 實(shí)驗(yàn)條件摸索不成熟
● 科研時(shí)間嚴(yán)重不足
● ……
2、地市級(jí)三級(jí)醫(yī)院科室主任、主任醫(yī)師、主治醫(yī)師等
● 公務(wù)繁忙
● 無精力、時(shí)間查找文獻(xiàn)
● 沒有時(shí)間尋找領(lǐng)域內(nèi)新熱點(diǎn)
● 科研圈子氛圍不夠濃厚
● 需要更前沿的科研技術(shù)應(yīng)用
● 晉升、晉職需要
● ……
3、繁重科研任務(wù)的臨床醫(yī)生
● 文章設(shè)計(jì)不完善
● 科研任務(wù)繁重忙不過來
● 臨床工作繁忙,千頭萬緒
● 周圍環(huán)境和條件的局限
● 缺少實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
● ……
4、有志于科研的各級(jí)醫(yī)院臨床醫(yī)生/護(hù)士
● 奮戰(zhàn)在病房一線
● 時(shí)間都給了病人
● 有志于科研
● 心有余而力不足
● ……
整體外包服務(wù)介紹:星森林生物提供科研設(shè)計(jì)咨詢及輔助實(shí)施:相關(guān)文獻(xiàn)查閱、實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)可行性分析、基金標(biāo) 書撰寫、課題項(xiàng)目申請(qǐng)、整體實(shí)驗(yàn)實(shí)施、數(shù)據(jù)分析與處理、結(jié)題報(bào)告書寫以及課題相關(guān)資料培訓(xùn)。
● 根據(jù)客戶研究方向、基金標(biāo)書、實(shí)驗(yàn)課題外包目標(biāo)和要求,實(shí)驗(yàn)預(yù)算等設(shè)計(jì)可操作執(zhí)行的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方 案。
● 根據(jù)客戶研究團(tuán)隊(duì)的研究基礎(chǔ),幫助客戶策劃、設(shè)計(jì)可執(zhí)行的研究路線及實(shí)驗(yàn)方案。
● 幫助客戶解決實(shí)驗(yàn)方案中需要突破的重要實(shí)驗(yàn)問題,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程。
● 指導(dǎo)客戶篩選和確定實(shí)驗(yàn)方案中所需要的試劑、抗體及相關(guān)耗材。
● 根據(jù)客戶需求推薦適合客戶的其他增值外包服務(wù)。
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
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【星森林生物】已開展了數(shù)千個(gè)實(shí)驗(yàn)外包項(xiàng)目。我們專注于醫(yī)學(xué)課題研究,已從課題申請(qǐng)、方案設(shè)計(jì)、試劑采購、模型構(gòu)造、 標(biāo)本檢測、數(shù)據(jù)分析,各個(gè)環(huán)節(jié)積累了數(shù)千個(gè)成功案例經(jīng)驗(yàn),為數(shù)千個(gè)來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息請(qǐng)咨詢星森林生物。
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