雙熒光素酶檢測 基因編輯
雙熒光素酶報告基因檢測介紹
實驗原理
miRNA通過堿基配對結合到靶mRNA的3’UTR區,抑制靶基因的翻譯或對靶基因mRNA的降解達到調控基因表達的目的。將靶mRNA的3’UTR區構建至螢火蟲熒光素酶報告基因的3’端,與miRNA表達載體及海腎熒光素酶報告基因載體共轉染細胞,先后加入兩種底物熒光素,通過對熒光素酶報告基因的表達檢測確認 miRNA對靶基因的調控效果。
下圖為雙熒光素酶報告基因檢測載體的示意圖。
技術應用
通過miRNA靶標的鑒定從而進行miRNA功能的深入研究。
實驗流程
實驗結果展示
圖 1 hsa-miR-9-1 的靶點
篩選結果
1)四組質粒的 293 細胞共轉染后的細胞照片;
2)四組細胞的雙熒光素酶報告基因檢測柱形圖。
注:WT為野生型3'UTR 區的螢火蟲熒光素酶報告基因質粒,Mut為突變型3'UTR 區的螢火蟲熒光素酶報
告基因質粒,結果表明待研究的 miRNA 對靶基因有較明顯的調控作用。
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