直結(jié)腸癌動(dòng)物模型

誘發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型制作方法相對(duì)簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可以在較短時(shí)間內(nèi)大量復(fù)制，而且基本模擬癌變的過(guò)程，因此，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較廣。但是，由于誘發(fā)性腫瘤實(shí)驗(yàn)因存在環(huán)保問(wèn)題而需防護(hù)設(shè)施，實(shí)驗(yàn)條件要求較高。

造模機(jī)制

AOM法

AOM是DMH在肝臟的代謝產(chǎn)物，作用過(guò)程與DMH相似，它通過(guò)DNA烷化，促進(jìn)堿基的錯(cuò)誤配對(duì)而致癌。這兩種化學(xué)致癌物都可以誘發(fā)降結(jié)腸腫瘤，組織學(xué)表現(xiàn)類似人類散發(fā)性結(jié)腸癌。由于AOM相比DMH具有致癌作用穩(wěn)定、高效的特點(diǎn)，現(xiàn)正被越來(lái)越多的研究者采用。

AOM聯(lián)合DSS法

DSS是人工合成的一種硫酸多糖，將DSS溶解于水給敏感種系的小鼠或大鼠飲用，可引起以血便、潰瘍和粒細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的結(jié)腸炎癥，其病理改變接近人類潰瘍性結(jié)腸炎。DSS腸炎的發(fā)生可能與其影響DNA合成、抑制上皮細(xì)胞 增生、破壞腸黏膜屏障、巨噬細(xì)胞功能障礙及腸道菌群失調(diào)等有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，DSS所導(dǎo)致的炎癥以Th1/Th2細(xì)胞功能失調(diào)為特征，造成急性腸炎，經(jīng)過(guò)多個(gè)循環(huán)喂養(yǎng)動(dòng)物也可產(chǎn)生慢性腸炎，并伴有一定的腸癌發(fā)生率。加之AOM自身對(duì)腸道的影響，兩者聯(lián)合可以誘發(fā)穩(wěn)定的炎癥性腸癌。

實(shí)驗(yàn)方法

AOM法

生理鹽水配制成濃度為1.25g/L溶液，選用6周齡雌性ICR小鼠，10mg/kg體重每周一次，腹腔注射，連續(xù)應(yīng)用4周，觀察時(shí)間選擇實(shí)驗(yàn)第36周，以腫瘤發(fā)生為觀察終點(diǎn)。

AOM/DSS法

選用雌性ICR、C57BL/6J或Balb/e小鼠均可。通常選用相對(duì)分子質(zhì)量為40 000的DSS。第1天小鼠腹腔注射 7.5～12.5ms/ kg AOM，1周后飼喂(1％～3％)DSS1周，之后改為正常飲水14天為一個(gè)循環(huán)，共循環(huán)3次，稱之為“四步法”。 “兩步法”與前者的區(qū)別在于將3次循環(huán)的 DSS處理以后不做特殊處理縮短為單次循環(huán)，共兩步完成。 

模型特點(diǎn)

AOM法

①連續(xù)4周腹腔注射氧化偶氮甲烷10mg/kg為佳的給藥劑量，此劑量與動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境無(wú)關(guān)，劑量過(guò)高會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物死 亡率升高。劑量過(guò)低會(huì)導(dǎo)致癌癥程度較輕，不同的致癌劑佳的劑量取決于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳背景和給藥方式。

②每周腹腔注射氧化偶氮甲烷10mg/kg，連續(xù)4周，在第24周發(fā)生結(jié)腸癌的概率為100 ％。

③不同遺傳背景小鼠對(duì)AOM的敏感程度不同，敏感性由強(qiáng)到弱的順序?yàn)椋築ALB/C小鼠與ICR小鼠有相同的作用，對(duì)氧化偶氮甲烷最敏感，C57BL/6N小鼠其次。

④AOM誘導(dǎo)小鼠大腸癌的發(fā)生是一個(gè)長(zhǎng)期的多階段的過(guò)程，與人類大腸癌發(fā)生過(guò)程中細(xì)胞動(dòng)力學(xué)病理組織學(xué)和分子特征方面的變化特點(diǎn)非常相似。

AOM/DSS法

采用腹腔注射AOM(10mg/ kg)和飼喂2％DSS飲水處理雄性ICR小鼠后，可觀察到炎癥導(dǎo)致腫瘤形成不同時(shí)期的病理學(xué)改 變。第3周有2/5的小鼠出現(xiàn)結(jié)腸管狀腺瘤，第4周有2/5小鼠發(fā)生腺癌。此后，隨著時(shí)間推移，腫瘤發(fā)生率逐漸增加，第6周 100 ％小鼠發(fā)生腺癌。所有時(shí)間點(diǎn)都可觀察到結(jié)腸不典型性增生。AOM/DSS模型通過(guò)結(jié)腸黏膜的炎癥和不典型性增生使腸 黏膜受損，促進(jìn)腫瘤產(chǎn)生，伴有K-Ras和β-catenin基因突變、錯(cuò)配修復(fù)基因缺失和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性改變。

需確認(rèn)的信息

1. 模型種屬（大鼠還是小鼠或是其他種屬）

2. 動(dòng)物體重有無(wú)要求，年齡有無(wú)要求

3. 雌雄有無(wú)要求

4. 模型構(gòu)建具體方案

5. 取材要求（采血、取組織樣本）

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