10187ES Plant Tissue PCR Kit (With Dye)
| 參考價 | ￥50.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號10187ES
- 所在地上海市
- 廠商性質生產廠家
- 更新時間2023/11/27 13:00:10
- 訪問次數 197
| 5T | 50.00元 | 99 件可售 |
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企業簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質改造和酶進化技術為驅動，聚焦生命科學產業鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發、生產與銷售的高新技術企業，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發路徑，成為國內少數同時覆蓋三大品類生物試劑、兼備核心技術自主研發能力和規模化生產能力的高新技術企業，產品廣泛應用于生命科學研究領域、診斷與檢測領域和生物醫藥領域。
主營業務
公司憑借在蛋白質改造和酶進化領域的技術優勢和深耕生物試劑行業多年積累的豐富經驗，構建了品質優良、類型齊全、種類豐富的產品管線。自公司成立以來，公司研發、生產和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養系列、細胞轉染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫藥等領域。
發展歷程
榮譽資質
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權的方式保障核心技術和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設。截至2022年3月31日，公司已經獲得授權18項（其中發明14項、實用新型1項、外觀設計3項）和45項與生物試劑相關的軟件著作權，擁有經國家知識產權局商標局核準的注冊商標權37項以及4項境外注冊商標，是國家高新技術企業和上海市專精特新企業。
創新平臺
經過多年的產品研發技術經驗的沉淀以及持續的研發創新，翌圣生物積極開展“產學研”合作，與擁有生物催化與酶領域國家重點實驗室的湖北大學、擁有教育部工業生物領域重點研究基地的江南大學展開合作，優化生物試劑關鍵原料的生產和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術、生物信息技術、細胞生物學技術、免疫學技術、生化分析技術等生命科學領域的共性生物技術為基礎，建立了六大核心技術平臺——雙向分子酶理性設計與定向進化平臺、密度發酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關鍵原料研發平臺、高通量測序建庫試劑創新研發平臺、高性能單克隆抗體研發平臺和mRNA醫藥應用研發平臺，目前已經自主研發出20項核心技術，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發路徑，覆蓋技術研發、產品升級、規模生產和質量控制等生物試劑研發和生產的各關鍵環節。
工業化生產
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設運營的工業化生產基地，配有噸級發酵線、工業級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質量管理體系認證，從原料控制、生產管理、質檢管控、倉儲運輸等對生產線進行360度管理監督，保證產品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產品。
客戶服務
翌圣生物憑借優質穩定的產品質量、高效及時的響應能力、快速穩定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究、體外診斷、基因測序、生物醫藥等的生物試劑。與中國科學院、清華大學、北京大學、復旦大學、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業客戶建立了穩定、緊密的合作關系，公司產品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發表中。
公司企業文化
幫助客戶創造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領域全球Top⑩
◎ 具備驅動產業變革的技術創新能力
◎ 擁有一支持續學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術創新和產品升級，不斷拓展核心技術的應用領域，為客戶提供更為的產品與服務，助力我國打造自主可控的生物試劑產業鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰略，繼續布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產業發展貢獻力量。
分子生物學試劑，細胞生物學試劑，免疫學試劑，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業,制藥 |
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產品簡介
Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)植物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同類型植物葉片進行PCR擴增的試劑盒，適應性廣、穩定性強。試劑盒采用的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種植物樣品并釋放出基因組DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代謝產物等，即可將釋放出的基因組DNA作為模板直接用于PCR反應。此外，樣品使用量少，低至1 mm植物葉片即可進行實驗。
本試劑盒中提供的2× Plant Master Mix具有很強的擴增兼容性，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉基因植株鑒定、植物基因分型等。
組分信息
類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 10187ES05 | 10187ES50 | 10187ES70 |
Part I | 10187-A | Buffer P1 | 250 μL | 1.25 mL × 2 | 5 mL × 2 |
10187-B | Buffer P2 | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 | |
Part II | 10187-C | 2 × Plant Master Mix* | 50 μL | 500 μL | 1 mL × 2 |
*2× Plant Master Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑等，同時包含電泳Loading Buffer，PCR完成之后可直接電泳。
儲存條件
1. 試劑10187-A【Buffer P1】，置于2-8℃保存。有效期1年。
2. 試劑10187-B【Buffer P2】，中和裂解產物，利于更長時間保存樣本，置于2-8℃保存。有效期1年。
3. 試劑10187-C【2 × Plant Master Mix】，-25~-15℃保存，避免反復凍融。有效期1年。
使用說明
植物葉片
1、研磨裂解法：
a. 研磨儀破碎：將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用研磨儀加鋼珠（鋼珠直徑3mm左右，共2個）破碎葉片（45 Hz，1 min），葉片破碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
b. 槍頭搗碎：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，用槍頭將葉片搗碎，搗碎后溶液呈現綠色，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
1、加熱裂解法：推薦使用幼嫩葉片。將直徑5 mm左右的葉片置于50 μL Buffer P1中，95℃加熱5-10 min（確保裂解液 浸沒葉片），較難裂解的葉片（老葉片）可適當延長時間（10-20 min），加熱裂解后溶液呈現綠色，震蕩混勻，瞬時離心，上清液請放在4℃備用，取1 μL用于PCR擴增。
1、直接法：推薦使用幼嫩葉片。使用打孔器或者刀，將直徑1 mm左右的葉片直接加入到PCR反應體系中；復雜樣本或者是長片段的擴增，推薦使用直徑<1 mm的葉片。
PCR反應體系
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Plant Master Mix | 10 | 25 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 1 | 0.2-0.25 μM |
裂解產物（DNA模板） | 1 | 2 | - |
ddH2O | To 20 | To 50 | - |
表1 反應體系
【注】：各組分使用前應充分混勻。
模板加入量：小于PCR反應體系的5%，過多會嚴重抑制PCR反應，強烈推薦加入1 μL模板。葉片直擴優先推薦研磨儀裂解法。
引物終濃度：0.2-0.25 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度。
反應體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
對照反應：建議進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
為了更穩定的保存裂解后的模板，將轉移出來的上清液，按照裂解產物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混勻后-20℃保存，穩定保存隨時間和樣本狀態不同而有所不同。如果處理后的植物葉片上清液一周內用于PCR擴增，不用加Buffer P2，上清液請保存在-20℃。
反應條件
循環步驟 | 溫度 (°C) | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94 | 5 min | 1 |
變性 | 94 | 10 sec | 35 |
退火 | 50-65 | 20 sec | |
延伸 | 72 | 1 min/kb | |
終延伸 | 72 | 5 min | 1 |
表2 反應條件 | |||
【注】：
退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設置低于引物理論值 2-5℃。
延伸時間：需要根據片段的長度來確定，對于1 kb以內的DNA片段，建議延長時間為1 min。
注意事項
做葉片實驗時，建議使用新鮮采取的葉片組織，若為長期冷凍組織，需-80℃保存，應盡量避免反復凍融，以免造成模板降解，影響PCR效率。葉片組織以幼嫩為宜，若為成熟的葉片，避免使用葉片主脈部位組織。
建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率佳。
取樣時使用打孔器或者刀取適宜大小的樣本，樣本不同時，打孔器或者刀每次處理樣本前需清洗干凈。
對于葉片組織，建議取1-10 mm的葉片，過小會使PCR擴增產量低，過多會抑制PCR反應，采用加熱裂解法、槍頭搗碎、研磨儀破碎的方式處理植物葉片，處理后需震蕩離心，務必取上清液試驗，沉淀會嚴重抑制PCR反應。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
本產品僅作科研用途！
常見問題與解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對照、待測樣本均無條帶 | PCR反應體系或反應條件不合適。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。 |
PCR試劑保存不當失去活性。 | 2× PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。 | |
引物設計問題。 | 嘗試重新設計引物進行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱 | 裂解液、中和液加入比例不當，裂解混合液影響PCR體系的pH值。 | 正常條件下，中和后的裂解混合液的pH應該在7-8左右（裂解產物和Buffer P2嚴格按照5:1的量進行中和）。 |
樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存5天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應體系<5%范圍內優化模板加入量。 | |
PCR循環數不足。 | 適當增加PCR的循環數，推薦35-40循環為佳。因模板復雜，一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環為佳。 | |
非特異性擴增 | PCR退火溫度太低，循環數、引物濃度或模板濃度太高。 | 增加PCR退火溫度，降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯配。 | 重新設計PCR引物。 | |
配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。 | PCR反應體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應。 | |
陰性對照出現目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。 |
樣本間交叉污染。 | 每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |
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