腎盂腎炎動物模型  泌尿系統模型

慢性腎盂腎炎動物模型

實驗方法

利用傾斜平板法制備100000000/ml及1000000/ml兩種濃度大腸埃希菌(O111B4)菌液待用，使用前測集落形成單位(CFU)值 核實濃度。體重200g左右雄性大鼠，術前常規禁水24h，先用細線扎住大鼠陰莖。在乙mi吸入麻醉下，動物仰臥固定于手術 板上，常規消毒腹部皮膚并去毛，沿下腹部正中切開，充分暴露左側輸尿管及膀胱，在輸尿管中段用10號半圓針、0號黑線 向側腹部穿針，暫不結扎。用注射器向膀胱內注射100000000/ml濃度的菌液，每只注射量約0.5ml左右，常規手術關閉腹 腔。以適度松緊結扎側腹部黑線(24h后解除)，松開扎住陰莖的細線，術后恢復正常飲水與進食。分別于實驗預定時間作腎 功能及血生化指標測定；同時麻醉處死動物，取兩側腎臟，一半組織經固定液固定，作常規組織切片，光鏡下病理檢查；另 一半組織勻漿后作細菌培養。處死動物前膀胱穿刺抽取尿液作細菌培養。

模型特點

模型動物術后90d時，均表現為尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)/尿肌酐明顯升高；模型制作過程中，24h尿蛋白定量無 明顯增加。血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)分別于30、60、90d檢測無明顯升高。術后第7日時，模型動物膀胱尿標本及左腎組 織細菌培養為陽性，麥康凱培養基上為不透明紅色圓形菌落，血平板上則為稍凸、中等大小、邊緣整齊、不透明灰白色圓形 菌落；鏡下為革蘭氏染色陰性的粗短桿菌。細菌培養高陽性率可持續保持到術后第60日。肉眼觀察第7日時模型動物左側腎 臟明顯腫大，其表面可見粟粒樣膿腫，部分已融合成片；腎縱切面有膿腫形成；第15日時腎縱切面可見較多膿液，腎孟明顯 擴張；第30日時腎臟腫脹部分減輕，外觀仍見膿腫；第60日腎臟體積腫大減輕；第90日時左腎可見明顯皮質瘢痕形成，表 面凹凸不平，體積縮小。肉眼觀察未見右。腎有化膿灶或瘢痕形成，但可見右腎代償性增大。鏡下病理學觀察顯示，病變急 性期左腎腎盂黏膜上皮細胞壞死、脫落，腔內積膿，腎實質彌漫性化膿灶，小管腔內可見白細胞管型；7～15d時淋巴細胞 浸潤明顯；30d可見間質纖維組織增生，腎盂處瘢痕形成；60d時部分腎小球出現纖維化；90d時可見間質纖維化，并有灶性淋巴細胞浸潤。 

急性腎盂腎炎動物模型

單純感染模型

實驗方法

體重為200g左右大鼠，禁止飲水24h后，事先用細線扎住大鼠陰莖。在乙mi吸入麻醉下，動物仰臥固定手術板上，常規消毒 腹部皮膚并去毛，沿動物下腹部作正中剪開，充分暴露膀胱，用注射器直接向膀胱內一次性注射濃度為1000000/ml的大腸 埃希菌(O111B4)菌液，每只注射量約0.5ml，手術縫合切口，關閉腹腔。1h后松開扎陰莖細線。術后恢復動物正常飲水與進 食。分別于預定時間處死動物，取其兩側腎臟，小心去除腎包膜；然后縱向切開腎臟，一半勻漿后行細菌培養，另一半置于 固定液中固定，作常規組織切片，HE染色，光鏡下觀察。同期膀胱穿刺作尿液細菌培養。

模型特點

術后3d尿液能培養出細菌，于麥康凱培養基上生長出紅色圓形菌落；至7d時仍有80％的動物細菌培養陽性，15d時則僅有少 數動物細菌培養陽性。腎組織細菌培養大部分動物雙腎細菌培養為陽性，部分動物為一側腎臟培養陽性。至第15日時，仍有 少數腎臟細菌培養陽性。大體標本肉眼觀察可見模型動物雙腎體積均有不同程度增大，腎表面無明顯膿腫；其縱切面可見腎 盂擴張，黏膜充血，腎皮質、髓質分界不清。鏡下病理學觀察顯示，3d時腎盂黏膜下及間質區以中性粒細胞為主伴有少量淋 巴細胞的炎癥細胞浸潤，毛細血管擴張、充血，間質水腫。第7日時腎盂黏膜下及間質內可見淋巴細胞灶性浸潤，并可見少 量嗜酸性粒細胞，間質毛細血管擴張；至15d時仍可見間質淋巴細胞浸潤，毛細血管增生、擴張，并有少量纖維母細胞、肉芽組織形成。 

手術+感染模型

實驗方法

大腸埃希菌(O111B4)菌液的制備：將菌種接種于肉湯培養基，37℃、5％CO2孵箱內孵育12h，利用傾斜平板法制備 1000000/ml濃度菌液待用。體重為200g左右雄性大鼠，禁止飲水18h后經腹腔按30mg/kg體重劑量注射戊巴bi妥鈉麻醉。動 物仰臥固定手術板上，常規消毒腹部皮膚并去毛，鋪無菌手術巾。沿下腹部作長約2cm正中切口，逐層切開腹壁進入腹腔， 充分暴露左側輸尿管及膀胱；用4號縫合絲線從中段輸尿管兩旁分別向側腹部穿針并引出縫合線，兩針盡量保持相近，暫不 結扎，用動脈jia夾閉陰莖，用 TB針向膀胱內緩慢注入0.75ml菌液。然后拉緊腹壁外面的縫合線兩端，以適當松緊度“結扎” 輸尿管。逐層縫合腹壁切口，松開陰莖dong脈夾，術后動物恢復常規飼養，自由飲水和進食。手術后20h，拆去腹壁外面輸尿 管結扎線，使輸尿管重新開放。分別在規定的時間用動脈jia夾住大鼠陰莖后，用乙mi麻醉，仰臥于手shu臺上，無菌條件下開 胸、開腹，抽出心血和尿液，切取左右腎臟和脾臟，作肉眼檢查、細菌培養及病理組織學檢查。

模型特點

術后第3日模型動物膀胱尿液即能培養出細菌，于麥康凱培養基上生長出紅色圓形菌落。第7日時細菌培養陽性率分別可高達 80％以上，這種高陽性率可持續保持15d以上。結扎一側腎臟腎組織細菌培養也有細菌生長，未結扎一側腎臟細菌培養陽性 少見，且持續時間較短。心血和脾臟細菌培養均為陰性。肉眼觀察模型動物左腎體積較右腎有不同程度增大，左腎表面可見 數量不等的微小膿腫，個別腎臟有突出腎表面的較大膿腫；切面腎盂擴大，黏膜充血、腫脹，腎盂內有膿性分泌物，有的腎 切面可見微小膿腫或錐形炎癥灶。右腎外觀和切面未見明顯異常。鏡下病理觀察顯示，術后3d模型動物左腎腎盂腎盞黏膜充 血腫脹，有的可見黏膜表面有局灶性膿性分泌物，黏膜下可見大量中性粒細胞浸潤。腎間質血管充血，多數腎臟可見膿腫， 在一些腎乳頭部尚可見大小不一的錐形炎癥灶；腎小管不同程度擴張，以遠曲小管為重；小管周圍有較多中性粒細胞浸潤， 部分腎小管上皮細胞壞死、脫落，管腔內可見膿細胞及少量管型。腎小球無明顯損傷。術后7d動物左腎間質炎癥細胞減少， 腎盂黏膜下、腎小管周圍可見以中性粒細胞為主，伴有較多淋巴細胞和單核細胞的炎癥細胞浸潤；膿腫灶邊緣出現較多成纖 維細胞，灶內除有中性粒白細胞外，尚有大量淋巴細胞、單核細胞。腎盂黏膜充血腫脹減輕，黏膜下中性粒細胞細胞浸潤明 顯減少，出現較多單核細胞、淋巴細胞。右腎組織無明顯組織形態學改變。

需確認的信息

1. 模型種屬（大鼠還是小鼠或是其他種屬）

2. 動物體重有無要求，年齡有無要求

3. 雌雄有無要求

4. 模型構建具體方案

5. 取材要求（采血、取組織樣本）

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