急性肺損傷模型  呼吸系統模型

目的：

小鼠LPS誘導復制急性肺損傷模型，觀察研究藥物對小鼠急性肺損傷模型的保護作用及機制。

方法：

1、小鼠腹腔注射麻醉, 麻醉深度為中度 (昏迷但掐尾有反應)；

2、根據小鼠體重按10mg/kg的劑量, 計算10mg/mL濃度的LPS的給藥體積 (總體積控制在30～50μL) ；

3、移液器精確吸取所需滴注液體的體積, 右手拉住小鼠尾巴, 左手拇指和食指抓住小鼠耳朵, 控制住小 鼠的頭部, 輕輕推移液器, 槍頭可見吸取的小液滴 (約2μL/滴) , 輕輕靠向小鼠右鼻孔, 左手立刻快速有力度的 向上提30～40cm, 再緩慢輕輕回到左手起始位置 (小鼠始終保持鼻孔朝上) , 進行來回10次；

4、然后同樣的操作向小鼠左鼻孔滴加小液滴, 左右鼻孔依次滴加, 直至液體滴注完成, 最后松開小鼠, 將小鼠利用膠帶固定于鼠板, 腹部朝上、頭部朝上傾斜的體位保持30min以上, 待小鼠復蘇, 放回鼠籠飼養觀察。

對照組A和實驗組B小鼠肺組織病理圖(HE染色，×100)

模型評價：

1. 肺損傷后的大體觀察：

肺損傷后有肉眼可見肺部大面積出血滲出，可以直觀的反映肺損傷程度。

2. 肺的濕/干重比：

肺的濕/干重比是反應肺水腫的直接指標，也是反應肺損傷嚴重程度的敏感指標。建模后，大量液體滲出至肺泡和肺間質， 導致肺的重量增大，而肺的干重則不受影響。處死大鼠、剪斷氣管后取全肺，稱濕重，然后將肺置于65℃恒溫箱中干燥， 24h 后取出稱干重，計算肺濕/干重比值。

組織病理學：

取左肺4%多聚Jia醛固定，然后將肺組織常規脫水，石蠟包埋，切片（厚度為5μm），HE染色。HE染色肺組織學評價可以 直觀的反應肺損傷的程度，ALI組織病理學主要表現為肺泡中性粒細胞及紅細胞的滲出，肺泡壁透明膜的形成。HE染色后可 在低倍鏡下觀察到整個左肺組織的炎癥細胞浸潤、水腫以及損傷，評估肺部損傷分布情況；而高倍鏡下則可以對肺泡結構進 行辨認，對肺損傷程度進行評估和評分。

評分方法：取6個視野進行出血及水腫評分。

0分：沒有損傷

1分：<25%的損傷面積

2分：25%~50%的損傷面積

3分：50%~75%的損傷面積

4分：>75%的損傷面積

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