10154ES PCR高保真酶預混液(含染料) PCR Master Mix
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號10154ES
- 所在地上海市
- 廠商性質生產廠家
- 更新時間2024/9/4 17:02:22
- 訪問次數 543
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,制藥 |
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產品簡介
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)是即用型2×預混合溶液,包含Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及優化的緩沖體系。預混液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體,可簡便地進行高特異性的Hot Start PCR。預混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力,擴增目的片段的長度可長達13 kb,該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。適用于復雜模板的擴增,擴增產物為平末端。
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點,反應體系只需加入引物和模板即可,并可以通過兩步法的程序進行擴增,簡化了實驗步驟,節省了時間。本產品中含有電泳指示染料,PCR產物可直接進行電泳。另外,該產品還含有特異保護劑,使得預混液反復凍融后仍可維持穩定活性。
產品信息
貨號 | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08/10154ES60 |
規格 | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL/100×1 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用說明
推薦PCR反應體系
組分 | 體積(μL) | 終濃度 |
RNase-free ddH2O | to 50 μL | - |
DNA模板*** | 適量 | - |
Forward Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM)** | 2 μL | 0.4 μM |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye)* | 25 μL | 1× |
*在終濃度1×預混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
** PCR反應體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM,推薦0.4 μM。
***不同模板的推薦使用量(25 μL反應體系):
模板種類 | 擴增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL(不超過PCR反應總體積的1/10) |
推薦PCR擴增程序
兩步法程序(優先推薦)
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
延伸 | 68℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
2)三步法程序(常規程序)
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性* | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火** | 60℃ | 20 sec | |
延伸*** | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*預變性溫度和時間:推薦溫度:98°C,時間:3 min,高GC含量模板5-10 min。
**退火溫度和時間:推薦溫度:60°C,也可根據需要,設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec,可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
***延伸溫度和時間:推薦溫度:72°C。時間:30 sec/kb,復雜模板根據實際情況可延長至60 sec/kb。
3)梯度溫度退火程序(難擴增基因推薦程序)
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 15,每個循環降低1℃ |
梯度退火 | 70-55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
變性 | 98℃ | 10 sec | 20 |
正常退火 | 55℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4)不同擴增程序下的特點
程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 |
速度 | 最快 | 中等 | 慢 |
特異性 | 高 | 中等 | 高 |
PCR產量 | 中等 | 最高 | 中等 |
檢出率 | 高 | 中等 | 高 |
注意事項
1. 本產品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。