15057ES60 FuniCut™ SfiI
參考價 | ¥ 165 |
訂貨量 | ≥1臺 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 15057ES60
- 產地 上海
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2023/7/20 18:18:58
- 訪問次數 249
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供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 15057ES60 |
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應用領域 | 生物產業,制藥 |
產品簡介
FuniCut™系列內切酶是通過基因工程重組技術,可在5~15 min內精確完成DNA切割的快速限制性內切酶,適用于快速切割質粒DNA、PCR產物、基因組DNA等。FuniCut™系列快速內切酶共用一種酶切緩沖液,從而簡化了酶切反應體系,另外,有良好的酶活冗余度,可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產品信息
貨號 | 15057ES60 |
規格 | 100 T |
識別位置 | 5'-GGCCNNNN↓NGGCC-3' 3'-CCGGN↑NNNNCCGG-5' |
推薦反應條件 | 1×FuniCut™ 緩沖液;50°C孵育 |
酶活 | 20 U/μL |
失活條件 | 不可熱失活,請使用酚氯仿抽提或柱純化。 |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 15057ES60 |
15057-A | FuniCut™ SfiI | 100 μL |
15057-B | 10×FuniCut™ Buffer | 1 mL |
15057-C | 10×FuniCut™ Color Buffer* | 1 mL |
*10×FuniCut™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料,可將產物直接用于凝膠電泳。FuniCut™ Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期2年。
注意事項
1. 3 h孵育未表現星號活性,延時酶切可能出現星號活性。
2. 受CpG甲基化影響,剪切可能受阻。
3. 受Dcm甲基化影響,剪切可能受阻。
4. 本產品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應液(冰上操作)
組分 | 質粒DNA | PCR產物 | 基因組DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL (~1 μg) | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FuniCut™ SfiI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產物。未純化的PCR產物具備一定的離子強度,10×FuniCutTM Buffer加入量可適當減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗,酶切前需純化PCR產物。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴。
3) 50°C孵育15 min(質粒),或15~30 min(PCR產物),或30~60 min(基因組DNA)。
4) 酚氯仿抽提或柱純化(可選)。
5) 如果使用FuniCut™ Color Buffer進行酶切反應,得到的產物可直接上樣電泳。
2. 雙酶切或多酶切
1) 每種內切酶的用量為1 μL,并根據需要適當擴大反應體系。
2) 所有內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10。
3) 如果選用的幾種內切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,以較高的溫度進行孵育。
3. 質粒的擴大反應體系
組分 | 體積(20 μL) | 體積(20 μL) | 體積(50 μL)* |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
FuniCut™ SfiI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
*如果總反應體系大于20 μL,可使用水浴、金屬浴或沙浴,并增加孵育時間。
4. 不同DNA中的識別位點數
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 0 | 2 |
5. 甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無影響 | 剪切受影響 | 剪切受影響 | 無影響 | 無影響 |
6. 不同反應緩沖液中的活性*
反應緩沖液 | FuniCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
*活性數據來自翌圣生物限制酶標準反應體系下的檢測。
Ver.CN20230703
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