3AO 人卵巢癌細胞

（Human Ovarian Cancer Cells）

3AO 人卵巢癌細胞

一、T25 細胞收到后處理

1、觀察

細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿完*培養(yǎng)基并密封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞后，請

先打開外包裝，及時核對培養(yǎng)瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致，并仔細查看培養(yǎng)瓶是否有

破損或漏液等異常情況，如有破損或漏液等異常情況，請立即拍照，并聯系工作人員處理。

2、處理

（1）75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養(yǎng)瓶外部。

（2）待酒精揮發(fā)完*，在顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（40x，100x，200x，

各三張）。前三天的細胞照片為重要的售后依據，不提供照片默認收到時細胞狀態(tài)良好。

（3）不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞放入培養(yǎng)箱中靜置 2-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

（4）查看細胞說明書，按照細胞說明書中描述的培養(yǎng)參數進行常規(guī)細胞培養(yǎng)操作（見“細胞說明書”第一

頁）。 ? 貼壁細胞

? 未超過 80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中（對比培養(yǎng)使用），留大約

7mL 完*培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

? 超過 80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中的完*培養(yǎng)基收集至 50mL 離心管中（對比培養(yǎng)使用），根據情況進

行傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。首*傳代，建議 1:2 進行傳代（分兩個 T25）。傳代時

建議一瓶用原瓶中的完*培養(yǎng)基，另外一瓶用自行配制的完*培養(yǎng)基，二者進行對比培養(yǎng)。

? 若細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發(fā)生細胞脫落，這是正常現象。請將培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)液收集至

50mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，收集上清（對比培養(yǎng)使用），往細胞沉淀中加入胰，酶 1-2mL，

輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加入 5mL 完*培養(yǎng)基終止消化。1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上

清，加入 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸細胞。然后按 1:2 的比例進行傳代（分兩個 T25），補充完*培養(yǎng)基

至 5-8mL/瓶，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 二、凍存細胞收到后處理

1、觀察

收到細胞后，請檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損、干冰已完*揮發(fā)等問題，請立即

拍照，并聯系工作人員處理。

2、處理

（1）迅速將細胞取出轉移至液氮保存，建議盡早復蘇。

（2）復蘇第一管如有細胞活性問題，請對細胞進行不同倍數拍照（40x，100x，200x，各三張），并及時

聯系工作人員處理，后續(xù)會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管。特別說明：未與我方聯系擅自復蘇

第二管，出現問題不予售后。

三、細胞復蘇

（1）確認水浴鍋已升溫至 37℃，取 5mL 預熱的完*培養(yǎng)基于 15mL 離心管中待用。

（2）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中

無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

（3）將凍存管中的細胞轉移至含 5mL 完*培養(yǎng)基的 15mL 離心管中，1000rpm 離心 5 分鐘。

（4）棄盡上清，細胞沉淀用 1-2mL 完*培養(yǎng)基重懸，接種至 T25 培養(yǎng)瓶，補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶，

放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（5）貼壁 5 小時以上或次日，更換新鮮的完*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 四、細胞傳代

（1）細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。首先，棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 漂洗細胞 1-2 次。

（2）加入 1-2mL 消化液，置于培養(yǎng)箱中消化適當時間，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部

分變圓并脫落，即消化完*，將細胞迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化。

（3）輕輕吹打細胞，待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘。

（4）棄去上清液，然后按推薦比例進行分瓶傳代（收到細胞后首*進行傳代，推薦 1:2 比例進行分瓶傳

代），補充完*培養(yǎng)基至 5-8mL/瓶。

（5）放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。 五、細胞凍存

（1）細胞生長狀態(tài)良好，細胞密度達 80%-90%，即可進行細胞凍存。首先，棄去培養(yǎng)上清，用 PBS 漂洗

細胞 1-2 次。

（2）加入 1-2mL 消化液，置于培養(yǎng)箱中消化適當時間，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部

分變圓并脫落，即消化完*，將細胞迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入與消化液等體積的含 10%血

清的完*培養(yǎng)基終止消化。

（3）輕輕吹打細胞，待細胞完*脫落后轉移至 15mL 離心管，1000rpm 離心 5 分鐘。

（4）棄去上清液，往細胞沉淀中加入 1mL/支的立譜沃無血清凍存液（貨號：PZ110R），混勻后加入凍存

管中，并做好標記。

（5）將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可（如果追求更理想的細胞復蘇率，也可選擇使用程序降溫盒），

24 小時后轉入液氮中長期儲存，并做好儲存記錄。