| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,食品,農(nóng)業(yè) |
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本試劑盒利用實時熒光PCR檢測技術(shù)，以豬病病毒基因組中的高度保守序列為靶區(qū)域，設(shè)計特異性引物和TaqMan熒光探針，通過PCR擴增實現(xiàn)對豬病病毒核酸的快速檢測。
【主要組成成分】
1. 試劑盒包裝組成
序號 | 組成 | 規(guī)格 | 用量/個反應 |
1 | 2XAvantFast Probe mix | 1支，625μl/支 | 12.5μL |
2 | 引物探針 | 1支，375μl/支 | 7.5μl |
3 | 陽性對照 | 1支，250μl/支 | |
4 | 陰性對照 | 1支，250μl/支 |
【檢驗方法】
一、 使用前準備：
1. 試劑盒中各組分充分解凍并混勻。
2. 核酸提取尤其是針對RNA時最好采用冷凍高速離心機，操作前請將溫度設(shè)定在4℃預冷。
3. 推薦使用進口離心管和帶濾芯移液器頭進行操作，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套。
二、 核酸提取（在樣本處理區(qū)進行）：
1. 按照試劑說明書操作
三、 PCR擴增檢測：
1. 配液（在試劑準備區(qū)進行）：取出擴增反應液，室溫融化后充分混勻，短暫離心，并按反應個數(shù)分別取反應液和酶按照以下配比配制反應液：（注意應考慮有陽性對照和陰性對照甚至空白對照）
試劑 | 2XAvantFast Probe mix | 引物探針 |
用量（反應個數(shù)為ｎ） | 12.5μl×ｎ | 7.5μl×ｎ |
反應液配制時應充分混勻，短暫離心，按20μl/管分裝到PCR反應管中，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)；
2. 加樣（在樣本處理區(qū)進行）：分別加入5μl步驟二中處理好的樣本、陰性對照、陽性對照，蓋好管蓋，轉(zhuǎn)移至核酸擴增區(qū)；
3. PCR擴增檢測（在核酸擴增區(qū)進行）：
將反應管置于全自動熒光定量PCR儀樣品槽中，熒光通道選Hex，設(shè)置擴增反應條件為：
階段 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)次數(shù) |
| 預變性 | 95℃ | 2min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10s | 40 |
| 退火和延伸 | 60℃ | 30s |
*如果使用ABI系列熒光PCR儀，設(shè)置擴增體積為25μl，同時要選擇passive reference和quencher為none的模式。
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