外泌體指標(biāo)鑒定實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
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- 更新時(shí)間 2022/12/23 11:46:30
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制作動(dòng)物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測(cè) 病理學(xué)形態(tài)檢測(cè) 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè) 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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一、實(shí)驗(yàn)原理
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的分子機(jī)制剛剛開始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。
外泌體(Exosome)主要檢測(cè)指標(biāo)為CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等,針對(duì)外泌體的定性檢測(cè),至少選擇2-3個(gè)指標(biāo)就能滿足文章發(fā)表就可以。大部分文獻(xiàn)中沒有檢測(cè)內(nèi)參,個(gè)別文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作為內(nèi)參進(jìn)行檢測(cè),外泌體中的Actin、GAPDH和Tubulin的表達(dá)豐度相對(duì)于正常細(xì)胞樣品中的較低,可能會(huì)檢測(cè)不到任何條帶或者條帶微弱。
二、實(shí)驗(yàn)流程
1. 外泌體BCA法定量。
2. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)。
3. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜。
4. 膜的封閉和抗體孵育。
5. 結(jié)果檢測(cè)。