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克隆形成實驗

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   上海達(dá)為科生物科技有限公司,位于上海長江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺,能夠為廣大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。

公司擁有專業(yè)的實驗室、先進(jìn)的實驗設(shè)備和經(jīng)驗豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過高度細(xì)分、較好的服務(wù)平臺,為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。

我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松、更快捷。為了實現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實驗方法和引進(jìn)新的產(chǎn)品,控制和降低各種成本,為您的研究加油。這既是一項長期而艱巨的工作,又是一項光榮的工作,同時也是我們企業(yè)發(fā)展的動力源泉。

 

 

 

 

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應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
 
實驗步驟

 

1.取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細(xì)胞,并把細(xì)胞懸浮在10%胎牛血清的細(xì)胞生長培養(yǎng)基中備用。

 

2.將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,每組細(xì)胞每皿分別接種100個細(xì)胞于含10ml 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細(xì)胞分散均勻。

3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。

4.當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。

5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,固定15分鐘。

6.去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘

7.用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

8.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計數(shù)克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆數(shù)。后計算克隆形成率。

克隆形成率=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%

9.平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好,不能有細(xì)胞團(tuán),接種密度不能過大。



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