克隆形成實驗
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2022/12/23 9:31:45
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制作動物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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2.將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋,每組細(xì)胞每皿分別接種100個細(xì)胞于含10ml 37℃預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動,使細(xì)胞分散均勻。
3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
4.當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。
5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,固定15分鐘。
6.去固定液,加適量Giemsa應(yīng)用染色液染10~30分鐘
7.用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
8.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片,用肉眼直接計數(shù)克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數(shù)大于10個細(xì)胞的克隆數(shù)。后計算克隆形成率。
克隆形成率=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%
9.平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細(xì)胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關(guān)鍵是細(xì)胞懸液的制備和接種密度。細(xì)胞一定要分散得好,不能有細(xì)胞團(tuán),接種密度不能過大。